恶性腹水的抗血管生成基因治疗

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1、中文摘要恶性腹水的抗血管生成基因治疗研究生：赵霞指导教师：彭芝兰教授目的：肿瘤的生长和转移有赖于新生血管的形成。抗肿瘤血管治疗已成为癌症治疗的一种重要手段。内皮抑素(Endostatin)为胶原XⅧC末端裂解片段，是重要的内源性血管抑制因子。本实验利用重组endostatin腺病毒(aa—endostmin)腹腔局部注射，探讨其抗新生血管形成基因治疗对恶性腹水的治疗作用，并比较了与化疗药物顺铂(DDP)联合应用的疗效。材料和方法：利用已构建的重组入endostalin腺病毒，在体外分别转染SK0v3、H22肿瘤细胞，观察重组蛋白表达情况及其对培养内皮细胞的抑制效应；通过腹腔内分别注射

2、不同挤量的ad—endostatin1×109pfu(plaque—formingunits)、2×1舻pfIl、5×109pfu，每3天检测血中endostatin，观察ad—endostatin在体内的表达。用卵巢浆液性囊腺癌细胞(SKOV3)及肝癌细胞(H22)诱导的恶性腹水模型，在SKOV3、H22细胞接种3天后分别予腹腔内注射2×lOgpfuAd．Endo(内皮抑素重组腺病毒)、vector(空载体)及PBS，每3天注射一次，共注射3次。DDP(顺铂)处理组每周腹腔内注射DDP(200口∥鼠)，共注射2次，收集、测量腹水。用Evans蓝检测腹膜的渗透性、ELISA检测腹水中

3、VEGF水平、用流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡，免疫组化观察肿瘤结节内微血管的变化以及对小鼠生存期的影响等。结果：不同壁染复数的Ad．Endo感染肿瘤细胞均表达重组endostatin蛋白，并能抑制内皮细胞生长。动物实验表明Ad—Endo治疗组能明显抑制腹水形成、降低腹膜的渗透性，腹水中VEGF浓度受到明显抑制，肿瘤细胞、红细胞数目明显减少。肿瘤细胞的凋亡数增加，肿瘤组织微血管密度明显低于对照组(CD31染色)。小鼠的生存期明显延长，与对照组(vector及PBS)相比，有显著统计学差异(P

4、明显的抑制作用，能延长小鼠的生存期。Ad．Endo+DDP联合治疗对腹水形成抑制和小鼠生存期的延长作用较单独Ad．Endo或DDP处理组更明显著(P<0．01)。结论：该研究提示内皮抑素抗血管生成基因治疗有望成为治疗卵巢癌等引起的恶性腹水的方法之一，值得迸一步研究。与化疗联合应用可加强这种治疗效果，为临床综合治疗恶性腹水提供了新思路。关键词：抗血管生成基因治疗，内皮抑素，腺病毒，恶性腹水AbstractTreatmentofMalignantAscitesWiththeGeneTherapyBasedonAnti—angiogenesisPostgraduate：ZhaoXiaTut

5、or：Pr西PengZhi-lanObjective：Tumorgrowthisavessel—dependentprocess。Anti—angiogenesistherapyhasbeenanimportanttreatmentofcancertherapy．Endostatin，theC-terminalproteolyticfragmentofcollagenXⅧ．isapotentendogenousvascularinhibitor．Inthisstudywemadearesearchoflocalantiangiogenicgenetherapywithrecombin

6、anthumanendostatinmediatedwithadenoviralvector，toevaluatetheeffectsofad—endostatinonmalignantascites．Method：WeinvestigatedtheexpressionofrecombinantendostatinproteininSKOV3cells，H22cellstransfectedwithconstructedrecombinantadenovirusandtheinhibitionofproliferationofculturedHUVEC．Theanimalmodels

7、withmalignantasciteswereestablishedwithSKOV3cells，H22cells．Themiceweretreatedwithintraperitonealinjectionof2X109pfu(plaque—formingunits)ad—endostatineverythreeday，totally3timesand／orinjectionof200Dg／mouseDDPeveryweek，totally2times