产肠毒素大肠杆菌LTBK99融合基因的构建与表达

《产肠毒素大肠杆菌LTBK99融合基因的构建与表达》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、学位论文独创性声明本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作T明确的说明并表示谢意。研究生签名吁程剑时间：妒‘年6R‘日学位论文版权授权书本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主一管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文用于赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查阅。有权

2、将学位论文的内容编入有关数据进行检索。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。研究生签名：呼短刽导师签名：7吩7穆恢髓闸I矽6年《冠‘B时间：护占年f月n日英文缩写AmpAPSDDBSACbdNTPDTTEBEDTAGenBankhrIPTGt(99KbKD(a)LLBmgMm】nmLmMODORFPAGE产肠毒豢人肠杆菌LTB—K99融合璀⋯的构建1J表达英文缩略词表英文全称AmpicillinAmmoniumpersulfatebasepalrbovineser

3、umalbuminCarbenicillilldeoxyribonucleosidetrephosphateDL—Dithioerythreito]Ethidiumbromideethylenediaminetetraceticacidgenebankhourisopropythis———’D-galactosideK99fimbriaantigenki10basekilodaltoFliterLuria—BertanimediummiligramMoleper1itermitilltemill

4、itlitermilJimoleper1iteFOpticaldensityOpenreadingframepalyacrylamideelectrophorisis中文名称氨苄青霉素过硫酸氨碱基对牛血清白蛋白羧苄青霉素脱氧核苷三磷酸二硫苏糖醇溴化乙锭乙二胺四乙酸核营酸序列资料库小时异丙基硫代一D一半乳糖苷K99菌毛抗原千碱基对千道尔顿升LB培养基毫克摩尔／升分钟毫升毫摩尔／升光密度丌放阅读框聚丙烯酰胺凝胶电泳X-gal产肠毒索^肠杆菌LIBK99融台基川的f{=f缝’硝E逃po]ymerase

5、chainreaction聚合酶链式反应PfuDNApolymerasePfuDNA聚合酶pnvaluepH值raffinose棉子糖ribonuc]eieacidenzyme核糖核酸酶revolutionperminute转／分钟sadiumdodecylsulfate十二烷基磺酸钠second秒Heat—labileenterotoxinA热不稳定肠毒素A亚单位HeatlabileenterotoxinB热不稳定肠毒素B亚单位hydroxymethylaminomethans三羟甲基氨基甲烷

6、Tris．C1一acetate—EDTAbufferTris缓冲液TaqDNApolymeraseTaqDNA聚合酶Tris．C1一EDTAbuffer1、E缓冲液N，N，N，N-teramethylethylenedJamineN，N，N，N-四甲基乙二胺unit单位Minuteliter微升volt伏特电压5-broma一4一chloro一3一indoly～，Dgala一5溴一4一氢一3吲哚一一D—ctoside半乳糖苷‰慨D驰；卧D眦⋯州

7、妻～唧泌‰mm胁眦⋯他一。山。产肠毒素人物杆菌lT

8、B—K99融合坫川的f!!J锉’o表迓中文摘要根据公布的产肠毒素大肠杆菌(EnteFotoxiIqEscherichiacoli，E11EC)的不耐热肠毒素B亚单位(heat—labileenterotoxinBsubunite，LTB)和K99菌毛抗原的核苷酸序列。设计特异的引物，通过聚合酶链式反应(PCR)技术扩增得到LTB和K99基因。回收纯化后将LTB和K99基因用nDNA连接酶连于克隆载体pBS—T上，热击法转化受体菌大肠杆菌topl0，蓝白斑筛选阳性菌落，酶切鉴定、测序，证明其中含有

9、LTB和K99基因片段，分别命名为pBS—L1、B和pBS—K99。在此基础上构建LTB—K99融合基因的重组质粒pBS—LTB—K99。将鉴定结果正确的重组质粒和原核表达载体质粒pET一28a用BeamHf／xho[分别双酶切，通过T。DNA连接酶将目的基因片段克隆入表达载体中，经菌落PCR、质粒PCR扩增及质粒酶切鉴定，证实融合基因己克隆到表达载体中，且具有正确的读码框和方向性，表明『F确构建了LTB。K99融合基因的原核表达载体pET．LTB，K99。利用热击法将重组质粒pET．LTB—K