合并肝细胞脂肪变性的慢性乙型肝炎患者CD4CD25调节性T细胞的变化及意义

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1、中文摘要合并肝细胞脂肪变性的慢性乙型肝炎患者CD4+CD25+调节性T细胞的变化及意义摘要目的：检测合并肝细胞脂肪变性的慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血及肝内的CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)水平，研究CD4+CD25+Tregs与丙氨酸氨基转移酶(ALT)、HBVDNA、肝组织炎症活动度(G)的关系，并与CHB患者及正常对照组进行比较，旨在探讨肝细胞脂肪变性对CHB患者Tregs的影响及意义，为研究CHB的免疫发病机制和CHB患者临床治疗提供新的思路。方法：收集2008年4月．12月在我院治疗的合并肝细胞脂肪变性的CHB患者10例，

2、CHB患者20例。所有患者均进行了肝组织病理分析，并且6个月内未应用抗病毒及免疫调节治疗。CHB患者均符合2000年(西安)全国传染病与寄生虫病学会制定的病毒性肝炎诊断标准，肝细胞脂肪变性经肝组织病理证实。并选择同期在我院体检的正常对照19例。应用全自动生化分析仪检测血清ALT水平；酶联免疫法检测HBV血清学标志；定量PCR分析检测HBVDNA载量。并检测抗．HAV、抗．HCV、抗．HDV、抗．HEV、抗．HIV，以除外其它嗜肝病毒及HIV感染。取外周肝素抗凝血，应用CD4、CD25免疫荧光抗体染色，红细胞裂解液溶解红细胞，完全溶血后加0．02M

3、磷酸盐缓冲液洗涤，应用加多聚甲醛．磷酸盐缓冲液固定，重新悬浮中文摘要细胞，上流式细胞仪检测，淋巴细胞设门，分析CD4+T细胞中CD4+CD25+T细胞的百分比。HE染色观察肝组织炎症活动度和肝细胞病理变化，Masson三重染色观察肝组织纤维化程度。采用PowerVisionTM二步法对肝组织进行Foxp3免疫组织化学染色，棕黄色着色为阳性表达，每例肝组织选取阳性表达较多的5个高倍视野(x400)计数阳性细胞，取平均值。应用SPSS11．5统计软件对实验数据进行分析，组间比较采用Kruskal．WallisH检验或Mann．WhitneyU检验，两

4、组间构成比的比较采用x2检验，相关性分析采用Spearman秩相关检验。结果：l各组人群一般资料及ALT、HBVDNA水平：合并肝细胞脂肪变性的CHB患者及单纯CHB患者ALT水平明显升高，两组间ALT、HBVDNA水平比较，差异均无统计学意义(P值均>O．05)，正常对照组ALT水平均在正常范围(<40U／L)，HBVDNA均阴性(<1×103copies／m1)。2外周血CD4+CD25+T细胞水平：合并肝细胞脂肪变性的CHB患者CD4+CD25+T细胞百分比低于单纯CHB患者(U=36．0，P<0．01)，但高于正常对照组(U=36．0，P

5、<0．01)；根据ALT水平高低(ALT≥80U／L和ALT<80U／L)分为高ALT水平组与低ALT水平组，发现高ALT水平组CD4+CD25+Tregs百分比高于低ALT水平组(U=61．0，P<0．05)。3普通病理及Foxp3免疫组织化学染色：30例患者均进行了肝组织活检，其中肝组织炎症分级为Gl者0例，G2者14例，G3者16例，G4者O例；纤维化分期为S1者9例，S2者11例，中文摘要S3者10例，S4者O例。CHB患者肝组织主要表现为小叶内肝细胞变性、坏死及炎性细胞浸润，汇管区有炎性细胞浸润，并向小叶内延伸，甚至出现桥接坏死，汇管区

6、周围纤维化扩大，部分有纤维间隔形成；合并肝脂肪变性的CHB患者肝组织还有不同程度的脂肪变，以中央静脉周围最为明显，多呈大泡性，肝细胞体积较正常明显增加，极度肿胀，细胞质内充满脂肪空泡，细胞核偏位，脂变肝细胞界限不清，肝窦变窄。两组患者肝组织炎症分级、纤维化分期比较，差异均无统计学意义(P值均>O．05)。Foxp3在T淋巴细胞核内特异性表达，阳性细胞主要集中在炎症明显的汇管区，小叶内部分炎症坏死灶中也可见Foxp31jH性细胞浸润，正常肝组织中未见Foxp3阳性细胞。CHB合并肝细胞脂肪变性组阳性细胞数量明显低于CHB组(U=19．0，P<0．0

7、1)，但高于正常对照组(U=0．P<0．01)；肝组织炎症分级为G3组阳性细胞数明显高于G2组(U=32．0，P<0．01)。4相关性分析：CHB合并肝细胞脂肪变性组及CHB组HBVDNA水平与外周血CD4+CD25+T细胞的百分比无相关性，等级相关系数rs=O．081，P>0．05。结论：lCHB患者外周血CD4+CD25+T细胞明显高于正常对照组，并且高ALT水平组CD4+CD25+T细胞百分比高于低ALT水平组，G3组肝内Foxp3阳性细胞数明显高于G2组，表明Tregs与CHB患者肝脏炎症活动密切相关，在CHB进展中发挥重要作用。2在AL

8、T水平、HBVDNA载量、肝组织炎症分级及纤维化分期无明显差别的情况下，合并肝细胞脂肪变性的中文摘要CHB患者外周血CD4+CD25+T