HPLC法测定冬虫夏草菌粉及含片中腺苷的含量

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1、第28卷第2期广西师范大学学报：自然科学版Vo1．28No．22010年6月JournalofGuangxiNormalUniversity：NaturalScienceEditionJun．2010HPLC法测定冬虫夏草菌粉及含片中腺苷的含量俞青芬(青海民族大学化学系，青海西宁810007)摘要：采用Kromasil—C18(4．6mm×250mm，5m)色谱柱，以0．05mol／L磷酸二氢钾一甲醇(90：10)为流动相，流速为1．0mL·min_。，检测波长260am，柱温为35。C，建立HPIC法测定冬虫夏草菌粉及含片中腺苷的含量。实验结果表明，腺苷含量在0．005~0．2tig(

2、r=0．9993)范围内呈良好的线性关系，平均回收率为101．19％，RSD=1．45一3)。该方法准确可靠、结果稳定、重现性好，可有效控制制剂的质量。关键词：冬虫夏草菌粉；含片；腺苷；HPLC中图分类号：0652文献标识码：A文章编号：1001—6600(2010)02—0065—04冬虫夏草ECordycepssinensic(Berk．)Sacc．]为麦角菌科真菌冬虫夏草菌在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座及幼虫尸体的复合体，是中国特有的虫生真菌，是传统的名贵药材，它能补肾壮阳、易肺平喘、止血化痰，可用于治疗多种疾病，如病后体虚、阳痿遗精、肾虚腰疼、健忘、肺虚咳喘等E¨。现代医学研究也证实

3、，虫草有祛痰平喘、改善肾功能、提高免疫能力、降血脂、调节性功能、抗衰老、抗癌[2]等作用。冬虫夏草的主要成份为腺苷，2000版中国药典[4]及文献E53均采用高效液相色谱法测定腺苷的含量。但在实验中采用上述2种方法检测，峰形对称性不好，严重拖尾且有一干扰峰。反相HPLC色谱法具有快速、准确、简单、精密度高、重复性好、检出限低等优点，在中药材及其制剂有效成份分析检测方面有一定的应用潜力Es-。我们采用RP—HPLCD-lO3分离技术测定冬虫夏草菌粉及含片中腺苷的含量，方法具有快速、准确、重现性好及样品前处理方法简单易行、回收率高等优点[1，为其质量鉴定和制剂质量控制提供了理论依据，并可为含

4、上述藏药的制剂提供新的定量方法。1仪器与试剂Agilent1100高效液相色谱仪(杭州普惠科技有限公司)，配置手动进样器、在线脱气机、高压二元梯度泵、恒温柱温箱、DAD检测器，Agilent色谱工作站；KQ3200超声波清洗器。腺苷对照品(购自中国药品生物制品检定所)，水为自制三重蒸馏水，甲醇为色谱纯，其余试剂为分析纯。pH6．5的磷酸盐缓冲液：取0．01mol／L磷酸二氢钠68．5mL与0．01mol·L磷酸氢二钠31．5mL，混合，调pH-6．5。冬虫夏草菌粉、冬虫夏草含片由青海月王青藏药业有限责任公司提供。2试验条件2．1供试品提取溶剂的选择腺苷在水中溶解度最大，但以水为溶剂较难过

5、滤，且图谱峰形较难看，后经多次试验，采用30％乙醇为溶剂，超声提取L1。]30min即可基本提取完全。2．2检测波长的选择取腺苷对照品溶液适量，利用DAD检测器在200~400llm扫描其吸收光谱，结果显示在260nm处有最大吸收，故选择260nm为检测波长。收稿日期：2010—03—08基金项目：国家自然科学基金资助项目(30760195)通讯联系人：俞青芬(1975一)，女，青海乐都人，青海民族大学副教授。E—mail：yuqingfen0716@163．corn66广西师范大学学报；自然科学版第28卷2．3流动相的选择我们实验了磷酸盐缓冲~(pH6．5)一甲醇(85：15)及不同体

6、积比的0．05mol·L一磷酸二氢钾一甲醇作流动相，结果发现，0．05mol·L磷酸二氢钾溶液一甲醇(9O：1O)为流动相时，峰形及出峰时间适宜，为最佳流动相。3试验方法与结果3．1分析溶液的制备3．1．1对照品溶液制备精密称取经五氧化二磷减压干燥24h的腺苷对照品8．0mg，加入30的乙醇溶液溶解，定容稀释至25mL，摇匀，作为对照品贮备液。3．1．2样品预处理精密称取冬虫夏草含片和菌粉各1g，分别准确加入3O的乙醇溶液10mL，称定质量，超声30min，冷却，再称定质量，用稀乙醇补足减失的质量，摇匀，过滤。按同样方法连续超声3次，将所得滤液置于5OmL容量瓶中稀释至刻度，摇匀，作为供

7、试品溶液。3．2色谱条件色谱柱~Kromasil—C18(4．6mm×250mm，5m)；流动相：0．05tool·L磷酸二氢钾一甲醇(90l10)；检测波长260nm；流速1．0mL·min_。；柱温：35。C。3．3分析方法学考察’3．3．1系统适应性试验分别精密吸取供试品溶液及对照品溶液各1OL，进样，在3．2色谱条件下测定腺苷含量(见图1)。048l248l2I6对照品样品图1对照品与样品的HPLC色谱图Fig．1HPICC