《动物生化实验》实验牛乳中蛋白质的提取与鉴定

《《动物生化实验》实验牛乳中蛋白质的提取与鉴定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、实验三、牛乳蛋白质的提取与鉴定一、实验目的：了解蛋白质的化学性质；掌握蛋白质的提取方法和鉴定理。二、实验原理：牛乳中含丰富的蛋白质（水分87.8%、脂肪3.5%、蛋白质3.1%、乳糖4.9%、灰分0.7%、能量29.kg/100kg），其中主要是酪蛋白。酪蛋白在牛乳中约占总蛋白量的5/6。1、酪蛋白提取的原理蛋白质是含羧基和氨基的两性电解质，在某一pH值溶液中，蛋白质分子所带的正电荷和负电荷相等，蛋白质以两性离子状态存在，这时溶液的pH值，称为该蛋白质的等电点（PI）,酪蛋白PI=4.8。在等电点时，蛋白质所带净电荷为零，溶解度最小，

2、蛋白质沉淀析出，利用蛋白质的这个特点可将蛋白质提取出来。由于粗提出的酪蛋白中还含有脂肪，可用乙醇和乙醚洗涤除去。2、酪蛋白鉴定的原理酪蛋白中含有酪氨酸残基，酪氨酸残基的R基团为：含酚羟基，可与米伦试剂反应先生成白色絮状沉淀，继续反应生成红色沉淀。三、操作步骤（一）酪蛋白的制备新鲜牛奶、醋酸纳缓冲液各5ml40℃分别加热至同样温度上清液：保留做鉴定（三）边加边摇混匀5min沉淀加4ml95%的乙醇离心5分钟上清液：弃去沉淀：做鉴定2000r/min离心（二）酪蛋白的性质鉴定1、溶解度取3支试管+0.1MNaOH、0.2MHCl、10%Na

3、Cl各2ml+少许酪蛋白→振荡→观察溶解快慢。2、米伦反应1mlH2O少许酪蛋白加热观察10滴米伦试剂（三）乳清中可凝固性蛋白质鉴定：将第一次离心所得的上清液徐徐加热，出现蛋白质沉淀（球蛋白、清蛋白）。四、实验结果五、讨论实验室普通离心机使用方法1.将离心机放在坚实而平整的工作台上；2.在适用的离心管中加入样品，必须对称配重，否则会损坏离心机；3.按离心机转头的离心管位置刻度所对应孔插入，放下离心机顶盖；4.检查确认调速钮处于最低速位置；5.打开电源开关，调速到需要的转速；6.选择工作时间，调“选时”钮到需要的位置。7.离心完成，离心机

4、自然停止。2、离心机使用注意事项（1）严禁各种液体和杂物进入离心工作室，那样会损坏主机；（2）仪器电源线应有良好的接地，以免发生意外；（3）离心机工作时不要打开顶盖；（4）电压的高低以及不稳定现象直接影响本机的转速（但不会损坏电机）。对转速要求较高的使用场合，请使用稳压装置，使运转速度稳定。