激活蛋白1与甲减大鼠肾脏损伤的相关性研究

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1、中文摘要激活蛋白一1与甲减大鼠肾脏损伤的相关性研究摘要目的：甲状腺功能减退(以下简称甲减)可造成一系列靶组织及靶器官的损害，其对于肾脏结构和功能的损害已被大量临床及动物试验所证实。为研究甲减肾损伤的可能发病机制，本实验观察：制备不同水平的甲减动物模型，通过对大鼠甲状腺功能的测定确定模型复制成功；应用免疫组织化学方法检测激活蛋白．1(activatorprotein．1，AP．1)亚单位c．Jun、转化生长因子．B1(transforminggrowthfactor-Bl，TGF．B1)在甲减大鼠肾脏中的表达，并对其进行半定量

2、分析；应用RT-PCR检测c．Jun在大鼠肾脏组织的基因表达水平。初步研究甲减大鼠肾脏组织中AP．1、TGF．B1与肾脏损伤的关系，探讨AP．1在甲减肾损伤发病中的作用及机制，为l临床预防和治疗甲减肾损伤提供理论依据。方法：将Wistar大鼠随机分为轻度甲减组(GHG)、重度甲减组(DHG)和正常对照组(CL)，喂养12周后处死，分别检测血清总T3(TT3)、总T4(TT4)、游离T3(FT3)、游离T4(FT4)水平。并利用免疫组织化学、RT-PCR方法，系统分析了不同甲减水平大鼠肾脏组织中c．Jun及TGF．p1的表达差

3、异，并分析两基因与肾脏损伤之间的关系。本研究共分五部分：1实验性大鼠分组及动物模型的制备：选择4．5周龄(70—100g)Wistar大鼠，随机分为轻度甲减组(gentlehypothyroidgroup，GHG)、重度甲减组(densehypothyroidgroup，DHG)中文摘要和正常对照组(control，CL)，每组10只，适应喂养1周，条件饲养11周，雌雄各半。饲料实测含碘量为50I，tg／kg，天津自来水实测含碘量8岭／L，每升饮水中加入KI量：DHG：0gg，GHG：163．8岭，CL：381．7岭，按大鼠

4、每日进食20g，进水30ml来估计每日总碘摄入量。2血清学测定：分别留取三组动物的不抗凝全血4ml，离心，吸取血清约2ml，利用化学发光免疫分析方法测定血清TT3、TT4、FT3、FT4的水平。3甲减大鼠肾脏形态学改变：以模型为基础，对三组大鼠肾脏组织切片，HE染色，在光镜下观察其形态学变化。4免疫组化：对三组大鼠肾脏切片，进行免疫组化染色。观察核转录因子AP．1亚单位c．Jun和转化生长因子TGF．131在各组大鼠肾脏组织的表达，分析不同甲状腺激素降低水平对c．Jun和TGF．[31表达的影响，及c．Jun、TGF．131

5、与肾脏损伤的关系。5甲减大鼠肾脏c．Jun的基因表达：取．80℃保存的新鲜肾脏组织，利用Trizol一步法提取总RNA，再逆转成eDNA，应用RT-PCR的方法扩增目的基因c．Jun，13-aetin作为内参照，1．2％琼脂糖凝胶电泳后应用MIAS．2000凝胶成像系统进行灰度测量，结果取目的基因与内参照的比值进行半定量分析。结果：1重度甲减组与正常对照组相比TT3、TT4、FT3、FT4均明显下降(尸

6、TT4、FT4明显下降(氏O．01)，TT3、FT3稍有降低(尸>O．05)，无显著性意义。中文摘要2在光镜下观察HE染色切片，与正常对照组相比，轻度甲减组肾小球、肾小管基底膜增厚，肾小球系膜基质增多、系膜区扩大，肾小球面积减小。重度甲减组比轻度甲减组变化更加明显。3正常对照组肾组织可少量表达c．Jun，肾小球内的表达高于’肾小管。c．Jun在‘肾小球中的表达：重度甲减组与正常对照组相比显著增高(尸O．05)。c．Jun

7、在肾小管中的表达t重度甲减组与正常对照组相比显著增高(氏0．01)；重度甲减组与轻度甲减组相比显著增高(PO．05)。正常对照组肾组织中可见TGF．[31的少量表达，在肾小球及肾小管中的表达无明显差异。TGF．131在肾小球中的表达：重度甲减组与正常对照组相比显著增高(P

8、度甲减组与轻度甲减组相比显著增高(P<0．05)；轻度甲减组与正常对照组相比显著增高(尸