光照对拟南芥灰霉菌毒素抗性的影响论文答辩

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1、设计（论文）题目:光照对拟南芥灰霉菌毒素抗性的影响姓名：阳启顺班级：10生科2班指导教师：杨红玉教授设计（论文）题目:光照对拟南芥灰霉菌毒素抗性的影响姓名：阳启顺班级：10生科2班指导教师：杨红玉教授提纲：一.课题的任务二.课题的目的和意义三.原始资料和参考文献四.基本内容及主要方法五.实验成果、结论一.课题的任务1.1制定实验方案1.1.1查阅相关文献资料1.1.2配制所需溶液1.1.3准备所需的实验材料和仪器设备1.2实施实验方案1.3分析实验结果，得出结论二.课题的目的和意义近年来，灰霉菌致病机制

2、的研究越来越广泛。本课题目的在于通过将灰霉菌大分子毒素渗入到拟南芥叶片中，设置光照、黑暗为对照实验，统计观察拟南芥叶片的病情，进一步探索光照对拟南芥灰霉菌毒素抗性的影响，进而为研究灰霉菌的致病机制作出铺垫。三.原始资料和参考文献杨红玉，李湘，张一凡，李然《灰霉菌培养及其对拟南芥的侵染》05夏绍嫘，杨红玉，吴嘉《灰霉菌与其分泌毒素对拟南芥致病性比较》11夏绍嫘《灰霉菌致病大分子的提取、分离及其特性鉴定》云师大11胡海林《拟南芥与灰葡萄孢菌互作中ESB1基因作用初探》农大13张美丽《拟南芥经灰霉菌胞外大分子

3、毒素处理后SOD的变化》09生科四.基本内容及主要方法4.1配制马铃薯蔗糖培养基、马铃薯蔗糖培养液、拟南芥种子MS培养基。4.2拟南芥的栽培、管理：种子消毒→铺种→恒温管理。4.3灰霉菌的培养：接种→振荡恒温（25-28℃）培养。四.基本内容及主要方法4.4灰霉菌大分子毒素的提取：菌体培养液→过滤去菌丝→离心去上清液→抽滤去除残留菌丝、孢子→透析→冷冻干燥→经0.45µm膜过滤→离心抽滤→粗提液（样品）。四.基本内容及主要方法4.5灰霉菌大分子毒素蛋白浓度的测定4.5.1紫外分光光度法（如下表）四.基本

4、内容及主要方法4.5.1紫外分光光度法（标准曲线）四.基本内容及主要方法4.5.2Bradford检测法（见下表）四.基本内容及主要方法4.5.2Bradford检测法（标准曲线）四.基本内容及主要方法4.6灰霉菌大分子毒素在光暗下侵染拟南芥的形态学观察4.6.1调整灰霉菌大分子毒素蛋白浓度大分子毒素蛋白浓度测定完成后，用灭菌蒸馏水将浓度调整到400µg/ml、200µg/ml。四.基本内容及主要方法4.6灰霉菌大分子毒素在光暗下侵染拟南芥的形态学观察4.6.2设置对照实验（如下表）四.基本内容及主要方

5、法4.6.3将灰霉菌大分子毒素渗入拟南芥叶片中拟南芥叶片先经75%酒精进行表面消毒，用1ml注射器针头在叶片上刺一小孔，用一手按住叶片背面，用1ml去针头的注射器沿针刺小孔将毒素渗入，每片叶片渗入10µl。4.6.4观察、统计拟南芥发病情况五.实验成果、结论5.1灰霉菌大分子毒素蛋白浓度测定结果用紫外分光光度法测定大分子毒素的蛋白浓度，蛋白质标准曲线如图3.1所示。实验测得待测样品在280nm下三次吸光度均值为0.490，代入标准曲线图关系式：y=0.0006x+0.0069，解得x=809µg/ml。

6、因此，样品浓度为809µg/ml。五.实验成果、结论5.1灰霉菌大分子毒素蛋白浓度测定结果用Bradford检测法测得样品吸光度值2.308，将该值代入标准曲线图3.2中关系式：y=0.0029x+0.0081，解得x=793µg/ml，也就是说样品浓度为：793µg/ml。由此可见，用两种方法测定灰霉菌大分子毒素蛋白浓度所得的数据并不一致，但是相差不大。实验用浓度可取平均值800µg/ml。五.实验成果、结论5.2蛋白质浓度测定方法比较、讨论五.实验成果、结论5.2蛋白质浓度测定方法比较、讨论本实验提

7、取的大分子毒素量（样品）很少，在测定其浓度时，尽量避免浪费。由以上方法可知，紫外分光光度法与考马氏亮蓝G-250需要的样品量较少，适用于本实验，故而选择这两种方法。另外，还需考虑所用方法的灵敏度范围。五.实验成果、结论5.3灰霉菌大分子毒素侵染拟南芥的形态学观察结果第一天：可明显看到400µg/ml、200µg/ml大分子毒素侵染的叶片组织变得透明，而此时无菌蒸馏水、BSA对照组拟南芥叶片只出现接种时留下的伤痕，并无叶片组织变透明的现象。五.实验成果、结论5.3灰霉菌大分子毒素侵染拟南芥的形态学观察结果

8、第二天：接种周围叶片组织开始出现萎焉症状，且面积进一步扩大，萎焉组织沿接种部位呈近椭圆形向四周扩散。第三天：可看到沿接种部位病症面积未明显扩大，以接种部位为中心出现一个近黄色“枯斑”，同时在离接种部位较远的叶缘也出现轻微卷曲或面积大小不等的“枯斑”。第四天：以接种部位组织为中心呈淡黄色病斑。五.实验成果、结论5.3灰霉菌大分子毒素侵染拟南芥的形态学观察结果第五天：将症状较为明显的叶片剪下，拍照如图3.1所示。五.实验成果、结论五.实验成果、