塞来昔布对嘌呤霉素氨基核苷诱导的足细胞凋亡影响的实验研究

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1、江苏大学硕士论文摘要足细胞(Podo啪)即肾小球脏层上皮细胞(GlomerularⅥsceralEpithelialCell)，是一种具有高度特异性且终级分化的细胞，不具有增殖特性。足细胞损伤、脱落或凋亡是肾小球硬化起始和进展的主要原因，而介导足细胞凋亡的启动因子及发病机制尚不清楚。环氧合酶-2(Cydooxygen雒e-2，COX-2)是前列腺素合酶的同工酶，其表达部位在肾小球皮质的致密斑、髓质问质细胞及亨氏襻升支粗段。有研究报道在人类肾小球足细胞可检测到COX-2表达，且在肾大部切除、111v-1肾炎、糖尿病肾病大鼠模型中足细胞COX-2的表达显著增强。已有动物实验表明特异性COX-2抑

2、制剂对许多慢性肾脏疾病有减轻蛋白尿，延缓肾损害进展的作用，但作用机制尚未完全阐明。本研究旨在通过特异性COX-2抑制剂塞来昔布(Celecoxib)对嘌呤霉素氨基核苷(PuromydnAminoImdeoside，PA)诱导的足细胞凋亡的影响，进一步探讨特异性COX．2抑制剂对足细胞保护作用的分子机制，为临床对慢性进行性。肾损害的防治探索出新的治疗靶点。方法1．将体外培养的条件永生性小鼠足细胞复苏并传代培养，并用PA干预足细胞诱导其凋亡，采用westemblot法分析COX-2在凋亡足细胞中的表达。为进一步研究特异性COx．2抑制剂塞来昔布对PA诱导的足细胞凋亡的影响建立实验基础。2．以条件

3、永生性小鼠足细胞株为研究对象，实验分为8组：正常对照组(CON)、嘌呤霉素氨基核苷组(PA)、地塞米松组(DEX)、地塞米松+嘌呤霉素氨基核苷组(DEX+PA)、氯沙坦组(LoS)、氯沙坦+嘌呤霉素氨基核苷组(LoS+PA)、塞来昔布组(CEL)和塞来昔布+嘌呤霉素氨基核苷组(CEL+PA)，在0h，8h，24h和48h对体外培养的足细胞分别用M丌比色法和Hoechst33258荧光染色法检测足细胞活性和凋亡水平；用C嬲p硒e．3活性检测试剂盒检测凋亡过程中c嬲pa∞．3蛋白酶的活性水平；用Westemblot技术检测凋亡过程中p53及COX．2水平。结果1．在33℃增殖状态下，足细胞呈鹅卵

4、石状，在37℃分化状态下的足细胞呈分叉状。在37℃分化14d后，用低血清培养液培养后，给予PA干预后，随时间延长，PA诱导的足细胞凋亡逐渐增多，在24h及48hCOx_2表达明显增加。江苏大学硕士论文2．与正常对照组比较，LOS、CELE、DE)(组足细胞凋亡率无明显变化(P>0．05)，PA组凋亡率在24h及48h明显增高(P0．05)，PA组增殖活性在24h及48h明显下降(

5、P<0．05)，而LOS+PA、CELE+PA、DE)(+PA组增殖活性在24h及48h比正常对照组下降，但较PA组明显升高(P0．05)。5．在24h及48h时，PA组p53表达较正常对照组明显增多，用LOS、CELE、DEX干预后明显降低(P<0．05)。6．正常对照组表达COX．2，用PA诱导凋亡后，24h及48h时COX一2表达明显增加，用LOS、CELE、DEX干预后COX-2表达水平有所减少(P<0．05)。结论1．COX-2在凋亡足细胞中的表达呈时间依赖性。2．塞来昔布可以抑制PA诱导的足细胞凋亡，p53参与了PA诱导的

6、足细胞凋亡过程，塞来昔布抑制PA诱导的足细胞凋亡的可能与足细胞所表达的COx．2水平有一定相关性。关键词：塞来昔布；足细胞；细胞凋亡；COX．2Ⅱ江苏大学硕士论文AbstractneVisceral出omerularepimelialceⅡ，als0Calledmepodocyte，isahiglllyspecilked觚dte珊inallydⅢerenti砷edcellwtlichplaySamajorroleiIlesta【blishingthe哲ome九1larfiltrationballrier．PodocytesthereforehaveliInitedabili哆t0beD印la

7、cediflost．PodocytesiIljur)r弱aresllltofapoptosis姐d／ordeta妇ent0fcellsfbmthegolmeml盯baScmentmembr龇leandmeiIla：bni哆ofpodocytest0replicateisamajorcauseofprogressivegIomemlardamage，butunderlyiIlgfators0fthepredis