广西猪源副粘病毒Guangxi株全基因的测序分析及生物学特性研究

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1、●▲lcb，t’分类号UDC硕士学位论文密级公珏编号～广西猪源副粘病毒Guangxi株全基因的测序分析及生物学特性研究冯淑萍学科专业亟随整医堂指导教师割椹婴究虽论文答辩日期—垫!Q生鱼旦鱼旦学位授予日期2Q!Q生鱼旦2窆旦答辩委员会主席整垂曩硒究虽论文评审人睦童拯研究员医淫搓巫究员卜lo◆▲r，：．i．0L10’一’▲■、：h∥，■I；㈡。L▲’名^螯‘_，t-、，I㈣嬲广西大学学位论文原创性声明和使用授权说明原创性声明本人声明：所呈交的学位论文是在导师指导下完成的，研究工作所取得的成果和相关知识产权属广西大学所有，本人保证不以其它单位为第一署名单位发表或使用本论文的研究内容。除已

2、注明部分外，论文中不包含其他人已经发表过的研究成果，也不包含本人为获得其它学位而使用过的内容。对本文的研究工作提供过重要帮助的个人和集体，均已在论文中明确说明并致谢。⋯⋯．~寒簟钟“／o日学位论文使用授权说明本人完全了解广西大学关于收集、保存、使用学位论文的规定，即：按照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本：学校有权保存学位论文的印刷本和电子版，并提供目录检索与阅览服务；学校可以采用影印、缩印、数字化或其它复制手段保存论文；在不以赢利为目的的前提下，学校可以公布论文的部分或全部内容。◆l请选择发口解密后发布⋯一静南⋯：讪＼锄锄日，‘&Y、》广西猪源副粘病毒Guangxi株全基因的

3、测序分析及生物学特性研究摘要猪的副粘病毒病是由副粘病毒科病毒引起的一类猪的热性传染病，包括尼帕病毒病、“蓝眼病’’、梅那哥病毒病等。1999年以来我国许多省市报道在猪体内也能分离到副粘病毒，经过鉴定，证实流行于我国境内的猪副粘病毒病是由猪源禽I型副粘病毒引起的。本实验通过RT-PCR从广西14个地市的732份发病猪组织中检出1株阳性样品，经鸡胚接种、血凝抑制实验、BLAST序列比对等方法分离、鉴定出1株猪源禽I型副粘病毒，命名为Guangxi株。对Guangxi株进行最小致死量致死鸡胚平均死亡时间(MDT)和1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)测定试验，其MDT值和ICPI指数分

4、别为60小时和1．53；Guangxi株F蛋白112-117位裂解位点氨基酸序列与强毒株一致，均为R-R-Q．R-R-F；I-IN基因编码的氨基酸长度也与强毒株一致；小鼠在接种病毒104小时后开始出现死亡，112小时内8只小鼠全部死亡，而60日龄猪接种lmL病毒后无任何异常表现，‘一⋯但接毒20天后产生特异性抗体，效价为7l092-91092。上述结果表明分离到的猪源禽I型副粘病毒Guangxi株为强毒株。参照GenBank中己发表的新城疫全基因序列，设计9对引物，以鸡胚尿囊液提取的病毒总RNA为模板，扩增出9段含有整个基因的相互重叠的序列，经克隆、测序、拼接后，得到了Guangx

5、i株的全基因序列。序列显示，分离到的广西猪源副粘病毒Guangxi株基因组由15，192个核苷酸组成，遵循“sixofrule"原I气之F◇0专丧气’遵则，从基因的3。端至5’端依次排列着YUTR，结构基因NP、P、M、F、HN和L编码区，以及5'UTR。使用DNAStar分析软件分别进行各个基因的核苷酸和氨基酸同源性分析比较和系统进化树的绘制。6个基因的核苷酸同源性和氨基酸同源性最高值分别在94．4％-、,99．6％和91．4％'-'99．2％之问；系统进化树分析显示，Guangxi株属于基因II型进化分支，与广东2007年鸡源新城疫毒株、广西2003年鸡新城疫毒株、河北2007

6、年鸡新城疫毒株在同一个分支。关键词：猪副粘病毒病禽I型副粘病毒序列分析全基因生物学特性ⅡCOMPLETEGENOMESEQUENCESANDBIOLOGICALCHARACTERISTICSANALYSISOFSWINEPARAMYXOVIRUSGuangxiSTRAINABSTRACTPorcineparamyxovirusdiseaseisafeverishandcontagiousdiseaseinswinecausedbymembersofthefamilyparamyxovirdae，suchasNipahvirus，Menanglevirus，andHendraviru

7、s．AvainParamyxovirus1wasisolatedfromswinesince1999inmanyprovincesinChina．Inthisresearch，onepositivesamplewasidentifiedbyRT—PCRfrom732sickpigtissuesampleswhichcollectedfromdifferentregionsofGuangxi．AndthenanAPMV．1wasisolatedbychickembryo