农杆菌介导的拟南芥液泡膜NaH逆向转运蛋白基因（AtNHX1）转化烟草和马铃薯的研究

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1、分类号UDC甘肃农业大学密级单位代码10733学位论文农杆菌介导的拟南芥液泡膜Na+／H+逆向转运蛋白基因(爿蚋聊，)转化烟草和马铃薯的研究StudyonthetobaccoandpotatotraⅡsformationw{thArabidopsisVacuolemembraneNa+／H+antiportergeⅡe似小皿艘)王丽指导教师姓名堂焦萋型塑量!苴煎壅些盔堂兰塑：垫(!!!!掌科专业名称蔫菜学申请学位级别壤士论文答辩日期2006年6月9日研究方向塞塑蕉垄墨兰堡论文提交日期2006年6月2日学位授予日期；!塑生!旦!!旦答辩委员会主席至型墼量评阅八赵

2、长增教授!O∽年6月至堕型塾毽甘肃农业太学暑溉届藏士羊业论文摘￥937255摘要液泡膜Na+／H+逆向转运蛋白可使Na+区隔化进液泡，从而对细胞质内Na+解毒和细胞渗透调节起作用，是盐生植物和耐盐甜土植物抵御盐胁迫所必需的。本研究利用拟南芥液泡膜Na+压r逆向转运蛋白基因——‘4㈣首先进行模式植物——烟草的遗传转化，以确定该蛋白的功能，然后进行目标作物一马铃薯的遗传转化，创造马铃薯耐盐种质资源，为耐盐品种的培育奠定基础。已取得的研究结果如下：1．烟草遗传转化体系的优化：(1)卡那霉素选择压的确定：CV87品种为转化受体材料时，叶片分化和茎段根再生时的卡那霉素浓

3、度应为50mg／L。T12品种作为转化受体材料时，叶片分化时的卡那霉素筛选浓度应为100mg／L，根形成时的卡那霉素浓度为200mg／L；(2)头孢类抗生素对烟草叶片分化的影响及对根癌农杆菌的抑菌效果：不同浓度的6种头孢类抗生素(头孢曲松钠、头孢噻肟钠、头孢哌酮钠、头孢唑啉钠、头孢拉定和头孢他啶)对烟草叶片分化的影响不大，分化率均在85％以上；200mg／L头孢曲松钠和头孢噻肟钠就能对根癌农杆菌LBA4404起到较好的抑菌效果，并可使继代3次(60d)的烟草转化植株脱菌；(3)遗传转化条件的确定：叶片无需预培养、农杆菌OD600值0．3～O．5、侵染时间8～1

4、0miIl、共培养3d：2．烟草转化植株的获得：(1)对经卡那霉素筛选生根的烟草进行特异引物的PCR扩增，获得了1617bp的特异性片段，表明爿fⅣ溉，基因已导入烟草基因组中；(2)转基因烟草植株的耐盐性表现：转基因植株耐盐性明显提高，表现在含1．0％Nacl的MS培养基上可正常生长，在含1．5％NaCl的MS培养基上可发出根系，未转基因植株则不能正常生长；3．(1)马铃薯试管薯的诱导：液体培养法诱导效果最好，平均每株结薯3个。诱导方法为：将接于MS液体培养基+3％蔗糖上的试管苗茎段，在25士1℃、2500Lx连续光照下培养，25天后倒出培养基，加入MS液体培

5、养基+8％蔗糖+5．00mg／L6．BA+O．15％活性碳，2500Lx连续光照下培养2天，再放入25士1℃黑暗下培养8周；(2)马铃薯转化外植体及培养基的确定：试管薯薄片是较茎段转化率明显高的外植体，适宜的分化培养基为Ms+1．00m班n诅+O．20mg／LGA3+2．OOm班ZT+O．50m班6一BA；(3)马铃薯遗传转化体系的优化：1)卡那霉素选择压的确定：分化阶段和生根阶段的卡那霉素浓度均为50m叽；2)遗传转化条件的确定：试管薯薄片无需预培养，农杆菌OD600值0．5，侵染时间8～10min，共培养2d；4．马铃薯转化植株的获得：(1)对经卡那霉素筛

6、选生根的马铃薯转基因植株进行特异引物的PCR扩增，获得了1617bp的特异性片段，表明爿f删基因已导入马铃薯基因组中；(2)转基因马铃薯植株的耐盐性表现：转基因马铃薯植株的耐盐性明显提高，表现在含O．6％浓度的NaClMS培养基上，转基因植株能正常生长，未转基因甘肃农业太学嬲届磺士牛主论文植株则生长受阻。关键词：拟南芥液泡膜N删逆向转运蛋白基因(mM比w)：烟草；马铃薯：遗传转化：根癌农杆菌；耐盐II甘肃农业太学2泓届硕士年业论文Summan7Summa巧Na+，H+antiporterinthela唱evacuolecouldseparateNa+tovac

7、uolar，ithaStlle胁ctionofc)哇oplasmNa+detox坶a工1dadjustiIlgcello锄oregulation，a11ditisalsonecessaryofhaloph”esaIldglycophytessalt-toleraIlce．Ⅲsanicle廿a11sf0皿edNa+／H+antiponers矗om灯abidopsis-A舢硼toⅡ1emodeplanttobaccoandascertailled廿1egene’sfunction．Andmenitwas订ansfomedtot11egoalplantpotatoa

8、ndcreatedsaltt01era