高脂饲养大鼠肾脏微血管病变与脂毒性的关系及其机制研究

《高脂饲养大鼠肾脏微血管病变与脂毒性的关系及其机制研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应的法律责任。，。‘：，．；皇’∥_、··。?一j?。。。f_、i。．!：’?研究生签名：兰伟导师签名∥磷箩学院领导≤玺．：彩乏乡《J、。≮p：i’：、弘厂年；月彤卧r

2、“≯√。研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。．研究生签名：乡印导师签名：纠多≥p彦年；月才日中文摘要高脂饲养大鼠肾脏微血管病变与脂毒性的关系及其机制研究摘要目的：通过长期高脂饮食饲养的方法建立高脂肥胖大鼠模型；正常血糖高胰岛素钳夹实验评价其外周胰岛素抵抗水平；观察长期高脂饮食饲养后大鼠肾脏功能及结构的改变；探讨脂毒性对肾脏微血管病变的影响及吡

3、格列酮干预的作用，为有效预防和治疗本病提供理论依据。方法：选用8周龄健康雄性SD大鼠45只，体重2509左右，适应性饲养1周后，按照随机数字表将大鼠随机分为正常对照组(NC)、高脂饲养组(HF)和高脂饲养+nLL格列酮干预组(HP)，每组15只：NC组采用普通饲料喂养，脂肪占总热量的10％；HF组采用高脂饲料喂养，脂肪含量占总热量的66％；HP组高脂喂养同时给予吡格列酮15mg·kgl-d‘1剂量灌胃。饲养满32周后将各组大鼠置于代谢笼中收集24小时尿，用于检测24小时尿白蛋白定量；采血检测各项血清学指标；行正常

4、血糖高胰岛素钳夹实验后处死动物，迅速分离两侧肾脏，观察肾脏的颜色、质地，留左肾于4％的中性甲醛溶液，用于HE、PAS染色及血管内皮生长因子(VEGF)和细胞间黏附分子．1(ICAM．1)免疫组织化学染色，观察肾组织结构的改变和VEGF和ICAM．1的表达情况；右肾置于液氮，备检，用于实时荧光定量PCR法检测肾皮质VEGF和ICAM．ImRNA的表达；取腹腔、肾囊及睾丸等处脂肪称重，计为内脏脂肪重量，计算内脏脂肪重量占中文摘要体重百分比。日本OlympusAU400全自动生化分析仪检测空腹血糖；放射免疫分析方法测定

5、空腹血清胰岛素(fastinginsulin，FINS)、24小时尿白蛋白定量；酶比色法测定甘油三酯(triglyceride，TG)；酶法测定血清游离脂肪酸(freefattyacid，FFA)。正常血糖高胰岛素钳夹实验评价其外周胰岛素抵抗水平，行颈静脉、颈动脉插管，体重恢复后，从颈静脉导管以微量泵输入短效胰岛素，速率12mU．minq．kg一，同时输注20％葡萄糖溶液。每10min从颈动脉导管取血测定血糖值，根据血糖值调整葡萄糖输注速度，使血糖稳定在5．O±0．2mmol／L，维持120min，计算葡萄糖输注

6、率(GIR)。HE、PAS染色观察肾组织病理结构变化，SP法对肾组织标本进行VEGF和ICAM．1免疫组织化学染色，以DAB法显色，结果以IPP5．1图像分析系统进行半定量分析，比较肾小球平均光密度(肾小球着色面积IOD／肾小球总面积)。实时荧光定量PCR检测肾皮质VEGF及ICAM．1基因表达，用Trizol试剂一步法提取大鼠肾脏总RNA，ReverTraAce．GtcDNA试剂盒合成大鼠肾脏cDNA，采用ABI⑧PRISM7300实时荧光定量PCR仪进行基因检测。内参照为甘油醛．3．磷酸脱氢酶(Q心DH)。引

7、物均由上海生工生物公司合成。使用2‘△△Cr方法计算基因表达情况。用SPSS10．0统计分析软件处理实验数据，所得数据符合正态分布的以．2-t-s表示，偏态分布的变量数据以中位数表示，并经对数转换使之正态化后采用t检验及方差分析进行统计分析，若P

8、白蛋白定量均明显升高(P