柑桔碎叶病毒RTPCR检测技术研究及应用

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1、西南大学硕士学位论文柑桔碎叶病毒RT-PCR检测技术研究及应用姓名：唐科志申请学位级别：硕士专业：植物病理学指导教师：周常勇20060601西南大学硕士学位论文摘要由柑桔碎叶病毒(citrustatterleafvirus，CTLV)引起的柑桔碎叶病最早于1962年在隐症的北京柠檬上发现。CTLV可感染许多柑桔品种，引起用枳及其杂种作砧木的柑桔树嫁接口不亲和、植株矮化和叶片黄花。CTLV在我国分布相当普遍，越来越多地使用感病砧木，会严重影响我国的柑桔产业。CTLV传统的检测方法是指示植物鉴定，但其鉴定周期跃，季节性强，且需要温网室等设施。

2、因此，有必要建立快速稳定检测CTLV的技术。本研究参考Hailstones等【11建立的CTLV半巢式RT-PCR检测技术对田间病树不同部位和方位取样进行了检测实验，对四种感病寄主进行了全年检测和CTLV部分序列测定分析，并应用该技术对“948”项目引进的23个柑桔品种材料和重庆市百万吨工程项目788株过渡期候选母树进行了快速鉴定。主要结论如下：1、对同一种感病的寄主材料不同部位取样检测表明：除老皮外均能检测到CTLV；对两种感病的寄主材料，分别从同一株病树的三个不同方位取样检测表明：除14-2有一个方位外，均能检测到CTLV。说明CTL

3、V在植株内分布不均匀。2、对四种感病的寄主材料进行全年检测表明：该方法可以全年对田间的柑桔植株进行检测：但在8月份，经半巢式RT-PCR后电泳条带较弱。3、对“948”项目和重庆市柑桔百万吨工程样品快速鉴定表明：“948”项目引进的23个柑桔品种材料均呈阴性反应，百万吨工程788株候选母树中有2l株呈阳性反应，765株呈阴性反应。4、该方法可对甜橙类、柚、枳橙和多种杂柑等田间柑桔植株进行检测。5、对我国四个CTLV分离株与一个澳大利亚CTLV分离株、一个日本CTLV分离株和～个巴西ASGV分离株部分序列比对表明：本研究应用半巢式RT-PC

4、R扩增得到的片段是CTLV的CP基因片段；本研究中的CTLV分离株14—2、14—4与澳大利亚一个CTLV分离株亲缘关系较近，本研究中的CTLV分离株14—1、14．3与日本CTLV分离株Li一23亲缘关系较近。关键词：柑桔碎叶病毒；半巢式RT-PCR；快速检测；序列分析西南大学硕士学位论文abstractDetectionofCitrustatterle对virus(CTLV)bySemi．nestedRT_PCRCandidate：TangKezhi‘Supervisor：Prof．ZhouChangyon91。(1CitrusRes

5、earchInstitute，SouthwestUniversity,Chongqing，400712；2CollegeofPlantProtection，SouthwestUniversity,Chongqing，400716)AbstractCitrustatterleafdiseaseinducedbycitruslatterleafvirus(CTLV)wasfirstrepogedinlatentlyinfectedMeyerlemonin1962．CTLVCaninfectmostcitruscultivarslatently

6、．Bud—unionincompatibility,stunting，chiorosisareshowninthetreesgraftedontfifoliateorangeortrifoliateorangehybrid．ItisknownthatCTLViswidespreadinChina．CTLV-susceptiblerootstocksisrapidlyincreasing．ItcouldbecomeasignificantprobleminthecitrusindustryofCbJna．Biologicalindexing

7、isthetraditionalmethodforthedetectionofthediseaseandhasmanylimitationssuchastime-consuming，season-andgreenhouse—dependant．ThedevelopmentofrapidandreliabledetectionmethodsforCTLVareinneed．CTLVindifferentpartsandorientationsofainfectedtreeweredetectedbySemi—nestedRT-PCRdeve

8、lopedbyHailstonesetal[11(2000)．AnnualdetectionofCTLVinfourinfectedvarietieswasdonebytheSemi-nest