柑橘碎叶病毒侵染性克隆的构建

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1、分类号华中农业大学硕士学位论文柑橘碎叶病毒侵染性克隆的构建J1·J●⋯·■l⋯●乙OnstruCU0n0ImtecuoUSClOneOlUnrUStatterleafvirus研究生：卜振中学号：2010301110186指导教师：丁芳副教授指导小组：王国平教授洪霓教授徐文兴副教授王利平讲师专业：植物病理学获得学位名称：农学硕士密级研究方向：植物病毒学获得学位时间：2013年6月华中农业大学植物科学与技术学院二。一三年六月华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书学位论文龟如需保密，解密时间年月日是否保密I

2、UllIIIIIAIJIIIIIIIIIIII

3、J独创性声明Y2393971本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，指导教师对此进行了审定。与我一同Z-作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明，并表示了谢意。’，l，研究生签名：十才阢v孝时间：@，多年多月上日学位论文使用授权书本人完全了解华中农业大学关于保存、使用学位论文的规定，即学生必须按照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存提

4、交论文的印刷版和电子版，并提供目录检索和阅览服务，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。本人同意华中农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容，为存在馆际合作关系的兄弟高校用户提供文献传递和交换服务，同时本人保留在其他媒体发表论文的权力。注：保密学位论文(即涉及技术秘密、商业秘密或申请专利等潜在需要提交保密的论文)在解密后适用于本授权书。溯黼张手枷才锄鲐了男签名日期：C；L口／多年多月』日签名日期：屈曰年占月占日注：请将本表直接装订在学位论文的扉页和目录之间柑橘碎叶病毒侵染性克隆的构建目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯iABSTRACT．．．．．．．⋯⋯．⋯．．⋯．⋯．．⋯．⋯．．．⋯．⋯⋯．．．⋯．．⋯．⋯．⋯．．．．．⋯⋯⋯⋯．．．．．．⋯．．⋯。⋯．．．．．．⋯⋯⋯．．iii缩略语表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯v1文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11．1CTLV的分类地位和生物学特性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l1．1．1CTLV的分类地位⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．11．1．2CTLV的生物学特性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

6、⋯⋯⋯⋯⋯⋯．11．2CTL，v的分子生物学特性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯21．2．1CTLV的基因组结构⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．21．2-2CTLV的分子变异研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．31．2．3CTLV的表达策略⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．41．2．4CTLV的致病机理研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。51．3CTLV的侵染性克隆构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯61．3．1侵染性克隆技术⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯61．3．2RNA病毒的eDN

7、A侵染性克隆的构建策略⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．61．3．3CTIⅣ侵染性克隆构建的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．71．4选题目的及意义⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．82柑橘碎叶病毒砂糖橘分离物全基因组序列测定及分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．92．1研究材料及方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一92．1．1研究材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯92．1．2研究所用主要试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯92．1．3研究方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯92．1．

8、3．1总RNA提取⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯92．13．2琼脂糖凝胶电泳⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯102．1．3．3目的DNA片段的回收与纯化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．102．1．3．4大肠杆菌热击感受态细胞的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．102．1．3．5热击转化DH5Ⅱ感受态细胞⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯112．1．3．6质粒的小量提取⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯112．2CTLV砂糖橘分离物全基因组的扩增⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．122．2．1CTLV砂糖橘分离物全基因组的扩增引物⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯122．

9、2．2CTLV砂糖橘分离物全基因组扩增策略⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯132．2．3