利用酵母同源重组系统构建prsv-hn2侵染性克隆及其侵染力分析

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1、学校代码：学号：分类号：密级：大營硕士学位论文题目：利用酵母同源重组系统构建侵染件克降及其停染力分析作者：赵光远指导教师：周鹏研究员类别：学术型专业：微牛物学时间：二—五年五月TheConstructionofPRSV-HN2InfectiousClonesUsingYeasthomologousRecombinationSystemandit'sInfectivityAnalysisAThesisSubmitedinPartialFulfillmentoftheRequirementFortheMasterDegreeofSciencein

2、MicrobiologyByZhaoGuangyuanSupervisor:ZhouPengMajor:MicrobiologySubmittedtime:May,2015海南大学学位论文原创性声明和使用授权说明原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品或成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名‘日期：年：月日学位论文版权使用授权说明本人完全了解

3、海南大学关于收集、保存、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权海南大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密论文在解密后遵守此规定。论文作者签名：导师签名日期：年月日日期本人已经认真阅读“高校学位论文全文数据库发布章程”，同意将本人的学位论文提交“高校学位论文全文数据库”中全文，布，并可按“章程”中规定享受相关权益。同意论文提交后滞后：口半年；口一年年发布。论文作者签名：导师签名日期：胃年广

4、月、日曰期海南大学硕士学位论文摘要番木瓜是一种重要的热带和南亚热带地区经济作物。番木瓜环斑病毒病是影响其品质和产量的主要病毒病害，发病率高达以上，致使其种植业和相关加工产业的发展受到了极大的制约。目前，在栽培技术上仍然不能通过化学方法进行有效防治，而利用基因技术选育抗病的新品种是防治番木瓜环斑病毒病的有效途经之一。国内外研究人员已先后将外壳蛋白、复制酶等基因导入番木瓜，从而获得了抗环斑病毒的转基因番木瓜，但研究发现由于各地区的病毒株存在差异，导致目前己经获得的各种抗转基因番木瓜在不同种植地区表现出来的抗病能力不稳定且存在抗性差异，这使得通过基

5、因工程技术培育的新品种在生产应用上受到限制。所以，从分子水平上深入解析番木瓜环斑病毒的致病机理，这对寻找更广谱更有效的抗病毒新策略，以及培育具有应用前景的抗病新品种有重要的现实意义。本研究利用技术和快速末端扩增技术，对引起番木瓜环斑病毒病的海南海口分离物的基因组进行了克隆和全序列测定，全长包含不包括端的登录号为能编码个氨基酸。同时对基因组核苷酸序列及其推导的氨基酸序列进行了结构和功能分析，与台湾、泰国、印度、巴西、黑西哥、法国和夏威夷等国家和地区的分离物相比较，其核酸序列相似度达，氨基酸相似度为利用大肠杆菌构建基因组较大的属的病毒全长克隆时，

6、会出现基因组结构突变及缺失不稳定的现象。所以在本研究中作者将全长基因组分成四个大片段进行克隆，获得了、、、等个亚克隆；通过穿梭质粒并利用酵母同源重组系统构建了种全长克隆，第一种为包含全长的克隆载体，命名为；第二种为包含全长的表达载体侵染性克隆，命名为；另外三种克隆为包含全长并在其蛋白、蛋白、蛋白后分别插入酶切利用酵母同源重组系统构建侵染性克隆及其侵染力分析位点，构建成含有绿色荧光蛋白（基因的表达载体，分别命名为与。全长侵染性克隆通过农杆菌侵染法接种西葫芦和番木瓜，其、、、的侵染效率达到。全长的个侵染性克隆在接种天后都表现出系统性侵染，比接种自

7、然病毒的对照组推迟了周左右表现出病症。病毒与寄主的相互作用是病毒学领域重要的研究课题，而该领域取得的最新的研究进展很大程度上取决于侵染性病毒载体的构建，因此构建全长的侵染性克隆，不仅为在分子水平上研究侵染、遗传变异及发病机制奠定理论基础，而且实验中使用的酵母同源重组系统的快速构建方法也为其它马铃薯病毒属病毒侵染克隆构建提供了新的技术方法。关键词：番木瓜环斑病毒，侵染性克隆，全长序列，穿梭质粒，酵母同源重组系统海南大学硕士学位论文？，，，’，，利用酵母同源重组系统构建侵染性克隆及其侵染力分析，，，，，，海南大学硕士学位论文目录导番木瓜环斑病毒的

8、国内外研究现状及分析马铃薯病毒属番木瓜环斑病毒传播途径株系病毒粒子的生物学特性结构功能基因组结构与功能防治技术研究番木瓜抗病育种和组培研究弱株系的研究和禾用基因工程