蓝莓提取物改善阿尔茨海默病认知功能障碍的实验研究

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1、分类号：R181密级：学位类别：科学学位囚专业学位口冒学校代码：1062学号：20091014学科门类：医学又坪眚斜文母博士学位论文DoCTORALDISSERTATION论文题目：蓝莓提取物改善阿尔茨海默病认知功能障碍的实验研究TITLEStudyonthebenefitsofblueberryextractstocognitiveimpairmentwithAizheimer’Sdisease一级学科：预防医学二级学科：流行病与卫生统计学论文作者：指导教师：导师组成员：谭龙张万起教授蒋与刚研究员天津医科大学研究生院二。一三年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个

2、人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：2013年5月21日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。本论文属于保密口，在——年解密后适用本授权书。不保密

3、(请在相对应的方框内打“√”学位论文作者导师签日期：2012年5月21日日期：2012年5月21El彩孵名吕，獬名天津医科大学博士学位论文中文摘要目的(1)评价APP／PSl双转基因AD小鼠模型效果，明确其发病进程和特点，为后续研究提供一种稳定的AD动物模型：(2)观察蓝莓提取物(Blueberryextracts，BB)干预对AD动物学习记忆损伤的作用，以及对AJ3诱导海马神经元损伤的拮抗作用；(3)探讨BB上述作用的可能机制。方法AD转基因小鼠模型的建立：由两对APP／PSl小鼠繁育扩种，所繁殖的小鼠在40日龄时取鼠尾组织提取DNA，通过PCR扩增后琼脂糖电泳检测目标基因筛选出

4、阳性小鼠；在7月龄时，分别对阳性小鼠和阴性小鼠进行Morris水迷宫实验测试，评价小鼠是否出现学习记忆能力损伤，之后取脑组织及海马组织进行HE染色和刚果红染色，观察是否出现类似AD的典型病理改变。BB改善All学习记忆障碍的实验研究：(1)体外实验：培养新生大鼠海马原代神经元，设置正常对照组、AD组以及AI+不同浓度BB组，以BB预孵育24h后，再以5gmol／LAp25．35处理24h模拟AD损伤，MTT法检测各组神经元活力，并确定BB干预的有效剂量；(2)体内试验：根据基因型检测结果，将小鼠分成阴性对照(CT，溶剂对照)组、模型(AD，溶剂对照)组和模型干预(AD+BB，BBl

5、50mg／kg·bw)组。在小鼠3月龄时，对各组施加相应干预，持续16周，观察其外观变化，记录摄食量，Morris水迷宫试验评价学习记忆能力；之后处死小鼠，称量小鼠主要脏器重量并计算脏器系数；对脑皮层及海马组织进行病理检查，并计数凋亡、坏死神经元数目。BB改善AD学习记忆相关机制的探讨：分别从细胞水平和整体水平进行研究。实验分组及处理同上。采用实时荧光定量PCR(RT．PCR)检测MAPK／ERK信号通路分子ERKl／2、MEK2，甲基化酶DNMTl、DNMT3a和DNMT3b，组蛋白去乙酰化酶HDACl、HDAC2、HDAC3，脑源性神经营养因子(BDNF)和泛素羧基末端水解酶(

6、UCH．L1)的mRNA表达；采用Westernblotting检测ERKl／2、MEK2、DBDNF和UCH．L1蛋白的表达：检Nd,鼠脑组织及血清抗氧化防御系统功能，包括MDA、SOD、还原型GSH和GSH．Px；采用电生理学方法检测小鼠海马CAl区长时程增强(LTP)。分别从抗氧化、细胞信号转导、表观遗传学及突触可塑性的角度探索蓝莓神经保护作用的可能机制。天津医科大学博士学位论文结果AD转基因小鼠模型的建立：Morris水迷宫检测结果显示，至7月龄时，APP／PSl小鼠定向航行试验需要耗费较长时间才能到达平台，对训练成果记忆稳定和牢固程度较差：空间探索试验结果显示，APP／P

7、Sl小鼠在目标象限区域的穿越次数明显少于正常对照小鼠，出现明显的学习记忆能力损伤。HE染色显示，7月龄的APP／PSl小鼠脑组织及海马CAl、CA3区均出现明显的神经元凋亡、变性，神经元减少；刚果红染色表明，阳性小鼠7月龄时脑组织已出现B淀粉样蛋白沉积斑块。BB改善AD学习记忆障碍的实验研究：(1)细胞实验显示，0．4I．tg／mlBB可以对抗AD损伤，提高神经元活力，而499／ml及以上浓度的BB反而影响细胞生长，抑制细胞活力，并且随浓度的增高，细胞活力下降程度与B