甘薯茎线虫的形态学及rDNA比较研究

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1、中国农业科学院硕士学位论文甘薯茎线虫的形态学及rDNA比较研究姓名：杨玉文申请学位级别：硕士专业：植物病理学指导教师：彭德良20050601摘要本文对我国北京、河北、山东、江苏、安徽等5个省市10个不同地区的甘薯竿线虫群体进行了形态鉴定和分子鉴定，并对其ITS区域进行序列测定和分析，设计了我国甘薯苇线虫的特异引物。借助光学显微镜和扫描电镜，本实验结果表明：我国甘薯茎线虫的形态测鼙值和主要形态特征与腐烂茎线虫(DiO,lenchusdestructor)基本一致。用通用引物rDNAI／rDNA2扩增北京大兴、河北卢龙、河北抚宁、河北易县、河北滦县、河北滦南、山东平阴、安徽泗县等8个甘薯茎线

2、虫群体(I型甘薯举线虫)和食菌蔫线虫(Dmyceliophagus)的ITS区域均产生了约900bp的片段，而山东沂水、江苏铜山等2个地区的甘薯茎线虫群体(II型甘薯茎线虫)扩增出约1200bp的片段。用14种限制性内切酶进行rDNA—ITS—RFLP分析，结果显示：食菌茎线虫同我园的甘薯茎线虫差异很大：我国的8个甘薯茎线虫群体(北京大兴、河北卢龙、河北抚宁、河北易县、河北滦县、河北滦南、山东平阴、安徽泗县)均产生了相同的酶切谱带，同时山东沂水、江苏铜山甘薯茎线虫群体的酶切图谱具有较火的相似性，但是也存在一定的差异。经Alul、Rsal酶切可以区分山东沂水平¨江苏铜山的线虫群体。将本研究

3、的结果同Wendtetal．(1993)的酶切结果比较发现：山东沂水、江苏铜山同其比较相似，但是也存在一定的差异。用引物TW81lAB28扩增我国的甘薯茎线虫并测序，其中8个甘薯茎线虫群体(北京大兴、河北卢龙、河北抚宁、河北易县、河北滦县、河北滦南、山东平阴、安徽涧县)扩增序列}：=度基本为727bp：山东沂水群体序列长度为915bp，江苏铜山群体序列艮度为914bp。8个甘薯茎线虫群体之间相似性高达98．9％；其序列中缺少的188bp位于山东沂水和江苏铜山群体序列的第126．314位，正好处于其ITSl区域，其余的序列基本一致，只有10个碱基的差别。山永沂水群体的ITSI序列与GenB

4、ank中的腐烂茎线虫(AF363110)的ITSl相似性高达96．8％；江苏铜山群体与其相似性为92．1％。本实验对我国的两类甘薯茎线虫各设计了一对特异性引物。I型甘薯茎线虫特异引物为SSdx3和SSdx5，特异扩增片段为479bp：II秘甘薯孳线虫特异引物SSsj，和一个通川引物AB28共同扩增，特异扩增片段为623bp。并用双重PCR技术对11个茎线虫种群扩增检测．证实该引物是成功和可靠的。该引物为我国首例甘薯举线虫特异引物。本文对我国甘薯茎线虫群体的种类鉴定做了一定的研究，为我国甘薯茎线虫快速、准确的鉴定奠定了基础。关键词：甘薯茎线虫，形态鉴定，rDNAqTS．剐’LP，特异引物，

5、双重PCRAbstractMorphologicalandmolecularidentificationfortensweatpotatostemnematodepopulationscollectedfromBeijng,Hebei，Shandong,Jiengsu，AnhuiprovinceinChinawerecarriedoutinthisstudy．TheITSregionsofrDNAwerescquencedandanalyzed，andspeciesspecificprimersWeredesigned．Someimportantmorphologicalcharacte

6、rswereobservedwithbothLightMicroscopeandScanningElectronMicroscope(SEM)andmorphometficsWeremeasured．ItrevealedthatthesweatpotatostemnematodeinChinaWaSidenticaltotheDitylenehusdestructor．TheamplificationoftherDNA-ITSregionfromeightswectpotatostemnematodepopulationsofDaxingoftheBeiUngcity,Lulong,Fu

7、ning．Yixian，Luanxian，LuannanofHebeiprovince，PingyinofShendongprovinceandSixienofAnhuiprovince(codesDdl-Dd81inChinaendnmycefiophagusfromUKyieldedonesinglefragmentofapproximately900bp，whereasthePCRproductofITSfromtwoswea