大庆油田高效降解石油微生物的筛选

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1、学兔兔www.xuetutu.com石油天然气学报(江汉石油学院学报)2009年8月第31卷第4期JournalofOilandGasTechnology(J．JPI)Aug．2009Vo1．31No．t大庆油田高效降解石油微生物的筛选刘蕊娜(大庆油田有限责任公司采油一厂，黑龙江大庆163000)陶文(油气资源与勘探技术教育部重点实验室(长江大学)，湖北荆州434023)[摘要]从大庆油田的原油、油田地下水中富集、分离并筛选出以原油为唯一碳源的降解茵14种，并进一步将它们进行复配，研究了其中9组茵对原油不同组分的降解能力。结果表明，原油中不同组分可被降解的程度不同，经初步降解试验

2、，筛选出对原油降解率高的H菌和I菌2组石油降解菌。通过对其降解能力的测试，在摇瓶试验中，这2组菌对原油的降解能力很好，其降解率高达81．58。气相色谱分析结果表明，原油中的正构烷烃全部降解，iC15、iC16、iC18、姥鲛烷、植烷等异构烷烃也基本降解。此结果表明，这2组降解菌对原油的降解具有很好的效果，有较好的应用前景。[关键词]微生物；菌株；筛选；降解；气相色谱；大庆油田[中图分类号]TE357．9[文献标识码]A[文章编号]1000—9752(2009)O4—0143一O3近年来，我国微生物采油技术的研究和应用飞速发展，主要表现在3方面[1]：①覆盖面广，十几家单位开展了相

3、关技术的研究和现场试验；②现场试验和应用规模较大，十几个油田应用了微生物单井吞吐和单井处理技术，近10个区块进行了微生物驱油现场试验，还有两三家国外微生物技术服务公司长期为国内现场试验服务；③发表了大量微生物采油方面的文章，各大油田对该项技术已有一定程度的了解。国内外在微生物采油领域已经进行了许多的室内及矿场试验，积累了大量经验。但是，总体上来看，由于单井处理技术较为简单，目前单井吞吐试验多，而整装区块驱替试验少。微生物驱油技术的潜力还未充分发挥出来；在适合微生物驱的油藏条件评价、方案优化设计和菌种开发方面还缺乏依据和技术支持[4．5]。笔者主要是将高效降解的菌种筛选出来并对其进

4、行试验，混合菌还要进行菌株复配试验，从而获得降解效果更好的菌种。1试验材料与试验方法1．1材料1)试验油样试验油样来自大庆油田原油。2)试验茵种菌种取自实验室保存菌种(非纯菌)，菌种编号分初筛和复筛。初筛编号为：1、2、⋯、15；复筛编号为：A、B、C、⋯、J(其中包括空白样)。3)培养基o．4g／LMgSO4·7H2O+0．02g／LCaCl2·2H2O+lg／LKH2Po4+lg／LK2NPO4+lg／LNHN03+1L酵母膏+1L蒸馏水+微量元素液(按地层水离子浓度及总矿化度配制的微量原液)+O．5Fl。0．05g／L，pH值7．O～7．2。该培养基以原油为唯一碳源，在12

5、0r／min摇床、37℃下培养7d。1．2降解菌株的初筛和复筛试验将筛选并活化的菌种分别接人装有0．2g左右原油一培养基100ml三角瓶中进行培养。先筛选出几种降解能力较强的菌种，将这些菌株相互之间进行混合，重新测其降解能力，得到降解效果更好的混合菌株。其降解能力是通过表面张力、降解率和色谱图来确定的[6]。1．3方法1)培养液表面张力测定方法将锥形瓶中经微生物作用后的油用脱脂棉过滤出来，剩下的培养液[收稿日期]2009—03—2z[基金项目]湖北省自然科学基金项目(2007ABA020)。[作者简介]刘蕊娜(1981一)，女，2004年大学毕业，助理工程师，现主要从事石油地质及

6、微生物方面的工作。学兔兔www.xuetutu.com石油天然气学报(江汉石油学院学报)2009年8月用BZY～1型自动表面张力仪测定培养液表面张力。2)测降解率的方法将筛选并活化的菌种分别接人装有0．2g左右原油一培养基100ml三角瓶中培养7d后，用在二氯甲烷中预先处理过的脱脂棉过滤菌液，多次洗涤脱脂棉，用二氯甲烷对原油重新回收，用旋转蒸发仪干燥后称取残重，每一处理重复3次，计算平均降解率。3)原油的全烃气相色谱将萃取出的经微生物降解过的油用无水硫酸钠干燥，并准确称量发酵前后的重量，进行气相色谱分析。气相色谱分析条件：气相色谱仪为HP一5890Ⅱ型；色谱柱：DB-5石英毛细管

7、柱；气化室温度：320℃；程序升温：100℃恒温3min，以升温速率为4℃／rain升温到300℃，然后再恒温20min，载气N2流速1．2ml／min，H2流速35ml／min，空气流速400ml／min，尾吹气(N)流速26ml／min。2结果与讨论2．1培养液性能分析发酵前，油水界面分明，油呈小块状，放人摇床摇动片刻后，油可部分以大粒状分散，但静止时有油呈片状漂浮在液面上，水层澄清。发酵后，培养液出现混浊，原油呈细粉粒状，颗粒大小不等，浮于培养液面上，静止时油水已无清晰界面