ECV304细胞用于体外血管新生的实验研究

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1、ECV304缁麓篇母体羚盔警薪生的安验研究研究生：李明焕导嬲：爨锋粼教授专般；人体解剖冀蛆织胚胎学中文摘要硒毙背景；敷管新生是在原有微血管结梅的基础上妖出新血管懿生物学过程。血傺新生与肿瘤发艇发展、组织损伤修复锋霞要病理生理过程密切相关而备受重视。磷究者遏过建立搭肉、俸岁}盎繁赣擞模型磷究其形戏撬理，已取褥蓬娶进展。目前研究认必，血管新生主要是缅腿夕}基质蛋白降瓣活动的激潺或摊制的受嚣过糕，或者谠不露除段被套秘灏子激活熬痰皮缨愍对缨您乡}菱质敬震燮藏改造过程寅菰t就是盘管新整j建程。研究体辨舷管新生，涉及剿内皮绷胞来源的辩质憋、不f司细胞岁}萋质的属毪、瞧营薪生裁激霾子、其{

2、塞类型细胞筑参鸯簿复杂润戆，至今仍嚣簧进～步探寻较为理想的体外血管新生研究模测。ECV304细胞是自发转化的人脐静脉内受缀艟袜，莺磊{弋墙莽辩久辨静脉内旋穗院，兵奢童长活力强、胃多次穗代等优煮。僵遐它是否可赐予体外血管灏生研究模型，阑内外研究甚少。为此我髓采耀体外缨激培弊的方法进行了如下实骏研究：第一部分：ECV304细胞体外三维培养形成管状结构的观察曩静：疆察ECV304缎魔髂静二维蘩蒜毵否形成警状缎梅。方法：我们撼自然转化蛇人膀静脓内发缨施一ECV304细胞株霉

3、入实验，不用凝外鞠生长因子，不涂布基质，逡择低血清浓魔、低缅胞种檎密度或常规长期培养等祭臀避行二缝缕养。结栗：

4、在多种条件下，：维埔养的ECV304细胞都能形成管状结构，结论：提示ECV304纽艟瑶辘是研究锩辨盘管新生蠹簿翁内皮工其。芙键溺：ECV304缨腿，=维垮器，警状绩槐第二部分：体外血管新生三维模型的构建目的：以ECV304细胞为内皮工具，构建体外血管颓生的三维模型。方法：以自制的鼠尾胶原制成的凝胶作为细胞外基质，在凝胶上面种植ECV304细胞，长满单层后用含碱性成纤维细胞生长因子(b—FGF)的培养液刺激，用倒置相差显微镜观察ECV304细胞入侵凝胶的情况。结果：在倒置相差显微镜下可看到入侵到凝胶内不同层次呈伸展状态的内皮细胞，垂直切面上可见入侵的ECV304细胞形成树枝样发

5、芽结构。结论：自制的鼠尾胶原凝胶可以为内皮细胞提供良好的细胞外基质微环境，再加上必要的生理、病理信号刺激，将能够诱导ECV304细胞表现出血管新生中的迁移、增殖、发芽等步骤。ECV304细胞三维凝胶模型可用来研究血管新生。关键词：ECV304，鼠尾胶原，三维模型，血管新生第三部分：，b肌成纤维细胞诱导体外血管新生作用初探目的：探讨心肌成纤维细胞在血管新生中的作用。方法：分离培养乳鼠心肌成纤维细胞(cF)并收集其条件培养液(CF-CM)，用其作为ECV304细胞的培养液，3H-TdR掺入法检测CF—CM对ECV304细胞增殖活性的影响，并采用体外三维模型检测其是否能诱导ECV3

6、04向胶内入侵、发芽。结果：乳鼠心肌成纤维细胞条件培养液明显促进ECV304增殖(P

7、isisabiologicalprocessthatthenewmicro—vesselsemergefromthepre·existingones．Itisputallimportantpositionforitscloserelationtomanydiseasesincludingtllnlofs，wo豫d—healing，fibrosisandSOon．Investigatorshavemadesomeimportantprogressesaboutitsmechanismsbyin-vivoandin—vitrostudys。Itcarlbeconcludedtha

8、tcapillaryformationispresentedaStheproductofalternatecyclesofactivationandinhibitionofextracellularproteolysis．AssomeresearchersproposedthattheprocessofextracellularmatrixfECM)remodelingbycapillaryEChasbeenshowntobepermissiveforneovascularization．Thein-v