再生丝素膜对VEGF基因转录表达影响的实验研究

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1、再生丝豢膜对vEGF基因转录表达影响的实验研究中文摘要中文摘要目的：通过观察ECV304细胞和转hⅥ≥GFl65基因L929细胞在再生丝素膜上的生物学行为，研究再生丝素膜对VEGF基因转录表达的影响。方法：首先对物理交联再生丝素膜进行了毒性试验和粘附试验，并研究了其对附着L929细胞细胞周期和细胞凋亡的影响。通过ECV304细胞在再生丝素膜表面的培养，观察了细胞的生长形态，测绘了生长繁殖曲线，并通过EUSA方法测定了其VEGF的分泌水平。接下来用RT-PCR技术从ECV304细胞中克隆出hVEG

2、Fl65基因，构建重组真核表达质粒pcDNA3．O．VEGF，鉴定正确后用脂质体转染法导入”29细胞，G418筛选获得能稳定表达ⅦGF的L929转基因细胞。然后将转基因细胞在再生丝素膜表面培养，观察细胞的生长形态，用实时定量RT-PCR方法测定转基因细胞vEGF的转录水平，EUSA方法测定转基因细胞VEGF的表达水平。结果：再生丝素膜无细胞毒性，成纤维细胞在其表面粘附性能正常，对细胞周期和细胞凋亡未产生不良影响，也不影响血管内皮细胞的正常生长和其VEGF的分泌。成功克隆了hVEGFl65基因，构

3、建了重组真核表达质粒pcDNA3．0．ⅦGF，获得了稳定表达、，EGF的L929转基因细胞。转基因细胞在再生丝素膜上的生长也不受影响，实时定量RT-PCR和E江』SA检测显示再生丝素膜不影响该转基因细胞ⅦGF基因的转录与表达。结论：再生丝素膜不影响ECV304细胞和L929细胞的正常生长，再生丝素膜也不影响转hVEGFl65基因L929细胞ⅦGF基因的转录与表达。再生丝素膜具有优秀的生物相容性。再生丝紊膜对vBGF基因转录表达影响的实验研究中文摘要关键词：再生丝素膜；血管内皮生长因子；实时定量R

4、T-PCR；生物相容性Ⅱ作者：黄泉指导老师：缪竞诚、杨吉成ResearchonEf

5、fectofRegeneratedSilkFibroinFiImonTranscriptionandExpressionofVEGFGeneAbstI．actobjective：Onmeobsen，ationonⅡlebiolo百calbehaviourofECV304锄dtheL929一vEGFmlllsgeniccellcultiVa钯donregeneratedsilkfibroin矗lm，meefrect

6、ofregeneratedsilkfibroinfilmontranscriptionandexpressionofVaScularendothelial母．owtIlfactorgeneisstudied．Methods：IbgenemtedsilkfibroinfilmwastestedbytoxiceXperiment锄dadhesioneXp耐ment，吐leinnuenceonceUcycleand印optosisoft11e胁roblaStthatculviatedonregener

7、atedsiIk肋roinfiImwasd咖ctedbynowcytomet巧(FCM)．ECV’sgmwthshapeandgrowthcurveonregeneratedsilk6broinfilmwereobseⅣed，锄dtheinnuenceonVEGFsecretionofvascularendothelialcellt11atculviatedon埠generatedsilk肋roinfilmwasdetectedbyELISAtest．ThecDNA劬gmentencodingh

8、VEGFl65wasamplifiedbyRT-PCR．Thentherecombinameukaryoticexpressionplasm讨、vasconstnjctedandidentifiedbyendonucleasedigestion．necDNA胁蛐mw勰sequenced．TheL929、vaSinfectedbypcDNA3．O一ⅦGFrespectiVely，andtl忙positiveL929wasobtainedbyseIectionwimG418．111enthcL929

9、一ⅦGF饥111SgenicceIl’sgrowtllshapeonregeneratedsilkfibroiIlfilm、)l，邪observed，feal—timequantita_tiVereVersetr锄scriptasepolymerasech咖feactionOⅫ一RT—PCR)methoda11dELISAtestwereusedt0de鳅ttIetf彻sdptionandeXpressionofVEGFgene．Resu№：I沁genera僦silk肋roiIlfilmh豁no