甘蔗抗黑穗病性检测SCAR标记的建立

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1、福建农林大学硕士学位论文甘蔗抗黑穗病性检测SCAR标记的建立姓名：韩新运申请学位级别：硕士专业：作物栽培学与耕作学指导教师：许莉萍2003.5.1甘蔗抗黑穗病性检测SCAR标记的建立摘要由黑粉菌(UstilagoscitamineaSyd．)引起的甘蔗照穗病是甘蔗栽培上最主要的瘸郁之一，在lf{=界荇讯蔗fx．忤她发生，造成感璃t{^种栽琴，“氘和j_fl洌f分的，‘厩损火，在早地甘蔗上为害更为严重，培育抗病晶种是最有效的措施。迄今甘蔗抗黑穗病性鉴定，仍采用人工接利·田问种植的表型进行鉴定，但通过此法对抗性的确定至少需两年新植或一新～宿的种植鉴定，周期

2、艮、工作量大，难以对大规模的样品进行测试，只能在高代进行且存在环境的互作效应，针对抗瘸性的早代选择盲目性大。分子标记辅助选择是基于基因组核酸水平的差异，不存在环境的互作效应，因此。可显著提高鉴定的准确性和选择效率。本研究的目的是建立可检测甘蔗抗黑穗病性的SCAR标记。本文通过预备试验，优化了甘蔗RAPD反应组份和反应程序，建立了适于甘蔗的RAPD反应条件。采用随机引物PCR扩增，对杂交亲本Ya71—374、C01001及其部分杂交后代进行了RAPD分析，筛选到与抗、感特异的多态性片段各一条，片段大小分别约为700bp和800bp。采用T-MD18克隆载

3、体，对700bp片段进行克隆，通过PCR和酶切鉴定，筛选{jH性重组克陵子爝于测序。测序结果显示该片段的实际长度为702bp，根据其两端的序列，设计了～对上、下游长度分别为23bp和22bp的引物，并对上述材料进行PCR检测。结果显示所有材料均扩增出一条702bp的条带，但感病亲本和感病个体中还扩增出一条长约400bp的多态性片段；初步研究还显示～组用于常规抗性鉴定的标准对照种也有类似的标记结果，从而将RAPD标记转化为SCAR标记。该SCAR标记有望用于甘蔗抗、感黑穗病基因型的鉴定。其上、下游引物的序列如下：‘上游引物：5’TTCCCCCGCTGCC

4、CTC唧CTT3’下游引物：5’TTCCCCCGCTCGGACACCTGTT3’关键词：甘蔗@叼西最蝴officinurum)l抗黑穗病性／分子标记／RAPDISCAR5DevelopmentofaSCARMarkerforDetectionofSugarcaneSmutResistanceAbstractSugarcanesmutcausedbyUstilagoscitambleaSyd．isoneofthemostimportantdiseaseinsugarcane．Ithasspreadoutallovertheworldandcausesse

5、riouslossinstalkyieldandsucrosecontentinsusceptiblevarieties，CultivationofresistantvarietiesWasthemosteffectivemeasure．Bythetime，identificationofsugarcanesmutresistanceWaSstillconductedbyartificialinoculationandcultivationinthefield．Itmustbeconductedintwocropsofplantcaneoronecro

6、pofplantcanewithonecropofratoon．Itistimeconsumingandlandconsuming．So，itWasdifficulttoscreenaplentyofmaterialsbythismethod．A／so，theresultsofidentificationwillbeaffected鼯environment，Selectionofsmutresistanceinearlygenerationisimpossible．BasedonabasisofgenomicDNA，molecular-assisted

7、selection(MAS)ismoreefficiencyandaccuracyforidentificationandselection．ThepurposeoftheresearchistodevelopeaSCARmarkerfordetectionofsugarcanesmutresistance．First，optimizationofRAPDinsugarcaneWasconducted，Then，twopiecesofpolymorphicfragmentamplificatedbyrandomprimerwerescreened。On

8、eWaS700bpandanotherWaS800bp,Thefragmentof700bpl