超排卵周期生长分化因子9和生长分化因子9B表达及调控研究

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1、分类号：R711密级：内部2年学位类别：科学学位囹专业学位口0学校代码：1062学号：20081078学科门类：医学又洱酱科矢峥￥IANJINMEDICALU树lVERSI"博士学位论文DOCTORALDISSERTATIoN论文题目：超排卵周期生长分化因子9和生长分化因子9B表达及调控研究TITLETheresearchofGDF一9GDF一9Bexpressionandregulationinsuperovulationcycle一级学科：临床医学二级学科：妇产科学论文作者：王会妍指导教师：糜若然导师组成员：张云山天津医科大学研究生院二。一一年五月学位论文原创性声明本人郑重声

2、明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：皇篁兰牢日期：2。11年5月1。日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密囹，在—三年解密

3、后适用本授权书。本论文属于不保密口。(请在相对应的方框内打“√”)学位论文作者签名：皇：纽日期：2。11年5月1。日导师签名：雄日期：2。··年5月·。日天津医科大学博士学位论文中文摘要辅助生殖技术(AI盯)尤其是体外受精．胚胎移植(IVF．ET)的开展和成熟是治疗不孕、不育症最为行之有效的手段。控制性超排卵是IVF—ET妊娠率逐步提高的原因之一，然而不同个体的卵巢对外源性促性腺激素(Gn)有不同的反应。卵巢低反应的发生率约为12％～30％，以超排卵后获卵数目少和血雌二醇(E2)峰值低为特征，常导致治疗周期取消和低妊娠率，甚至部分患者只能选择赠卵。因此如何评估和改善超排卵周期卵巢

4、低反应是IVF工作中亟待解决的难题。生长分化因子．9(GDF．9)、GDF一9B作为卵源性生长因子近年来被发现可能是卵泡发育过程的关键调控因子，二者隶属转化生长因子．B(TGF．p)家族，通过自分泌及旁分泌方式作用于卵母细胞、颗粒细胞及卵泡膜细胞，调节卵巢局部细胞的分化、增殖，调控优势卵泡的形成及卵母细胞的成熟。研究GDF．9、GDF．9B表达与超排卵卵巢低反应的关系及调控机制，为临床改善卵巢功能、提高获卵率提供理论依据。第一部分GDF-9、GDF-9B表达与卵巢低反应的关系目的：研究超排卵周期GDF．9、GDF．9B表达与卵巢低反应的关系，探讨二者是否参与卵巢低反应的发生机制。

5、方法：选取行ⅣF．ET的患者70例，采用常规长方案进行超排卵，依据取卵时获得平均直径>14ram的卵泡数分为卵巢低反应组21例，正常反应组25例，高反应组24例。应用实时荧光定量聚合酶链反应(Real．timePCR)技术检测卵巢不同反应组患者卵泡壁颗粒细胞和卵丘颗粒细胞GDF．9mRNA、GDF．9BmRNA的表达，分析GDF．9和GDF．9B与卵巢低反应的关系，以及二者与超排卵获卵数的相关性。结果：卵巢不同反应组患者年龄、不孕年限、基础FSH、E2、LH水平差异均无统计学意义(P>O．05)。卵巢低反应组卵泡壁颗粒细胞和卵丘颗粒细胞的GDF．9mRNA相对表达量低于正常反应组

6、及高反应组，差异有统计学意义(P

7、段插入真核表达载体pcDNA3．1(+)，构建重组真核表达载体pcDNA3．I(+)／GDF．9；重组质粒以脂质体介导法转染人胚肾293T细胞诱导表达，免疫亲和层析法纯化目的蛋白。结果：阳性克隆质粒经酶切鉴定和测序结果证明pcDNA3．I(+)／GDF．9重组真核表达载体构建成功，Westernblotting确证纯化重组GDF．9蛋白成功获得。第三部分重组蛋白GDF-9对小鼠超排卵的影响目的：通过体内动物模型观察重组蛋白GDF．9对小鼠超排卵的影响，深入分析GDF．9对卵泡发育