EAPⅡ、ETS1在宫颈癌中的表达及其相互关系的研究

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1、山西医辩大学磺士学位论文EAPII、ETSl在宫颈癌中的表达及其相互关系的研究摘要ETS家族是一类转录因子，在组织的变异、淋巴组织的增生、侵袭和血管生成等方面发挥作用。ETS发挥作用时与其联合蛋白(associaledproteins)密切相关。本文研究了一种ETS家族成员一ETSl及其联合蛋白II(EAPII)相互作用促进宫颈癌转移的机制。目的：通过在基因水平和蛋白水平上对ETSl、EAPII的研究，探讨各类宫颈病变中ETSl、EAPII的表达。特别是在富颈癌的发生、进展中，两者的各自表达作用机制以及相关性。尝试阐明E

2、APII对ETSl转录活性的调控机制，为富颈癌的诊断和治疗提供理论基础。方法：本研究应用分子生物学的技术和方法，采用总RNA的提取，设计合成引物进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)，扩增两个研究片段：ETSl和EAPII。结果证明，在不同宫颈的组织中：从mRNA水平来看，两者具有相互抑制性表达。接着，我们应用蛋白质印迹法(Western．blotting)，分析蛋白水平上ETSl在不同宫颈组织中的表达量。最后，通过凝胶滞留电泳(EMSA)，应用探针标记技术，研究了蛋白、DNA结合的相互作用，在转录水平进一步揭示了EAP

3、II对ETSl结合DNA能力的调控作用。结果：本课题对在不同分型宫颈组织中ETSI和EAPII的表达进行测定，RT-PCR结果显示：随着向宫颈癌进展，ETSI的表达量逐渐增加，p<0．05。且在淋转的宫颈癌中比未发生淋转的宫颈癌表达高，p<0．01。证明了ETSl与肿瘤浸润和转移有一定的关系。而EAPIImRNA的表达随宫颈癌进展呈逐渐降低，p<0．05。说明EAPII否定地调整了ETSl的转录活性。Western．blotting结果显示与mRNA水平表达一致。EMSA结果显示：随着向宫颈癌进展，ETSl结合DNA的能

4、力增强，而EAPIt抑制其结合链力。可见EAPII是一个新的ETSl调节者。它调节了ETSl功能的特殊方面，而它们之间的进～步作用尚需用其它实验方法进行验证。关键词：ETSl，EAPII，mRNA水平，蛋白水平，转录山西医科大学硕士学位论文ExpressionandthecorrelationanalysisofEAPIIandETSIincervicalcancerAbstractEtsproteionconstituteafamilyandfunctionastranscriptionfactors．Asamembe

5、rofEts，ETSlplaysimportantrolesindifferentiation，lymphoidcelldevelopment，invasivenessandangiogenesis．SuchdiverserolesofETS1arelikelytobedependentonitsassociatedproteins．HerewedescribearlovelETS1interactingproteindesignatedasETSl一associatedproteinII(EAPII)．objectlv

6、e：Onthelevelsofgeneandprotein，westudiedtheexpressionofETS1andEAPIIinvariouscervicallesions．Especially,thefunctionmechanismofETSlandEAPIIduringthedevepmentsot、cervicalcancer．Inthesametime，wepreliminarilystudiedthatEAPIImodulatesETS1transcriationalactivity．Inordert

7、oprovidethetheoriesbasisforclinicaldiagnosisofprecancerousandearliercarcinomas．Method：Inthisstudy,thetechnologyandmethodarebasedonmolecularbiology．First，ETS1andEAPIIgeneswereamplifiedbyRT-PCRAfterbaitbeinggenerated．theresultshowedthatEAPIIandETSlwasinbihitedeacho

8、theronmRNAlevels．FollowingnuclearextractswerepreparedfromcervixandwesternblottinganalysisindicatedtheexpressionofETSlinvariouscervicallesionsonproteinlevels．At