愈精煎治疗精液异常不育的临床观察

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1、愈精煎治疗精液异常不育的临床观察　　【摘要】　目的　建立人成骨肉瘤细胞系。方法　采用原代组织块培养法对成骨肉瘤手术标本进行培养，对存活细胞进行形态学观察、组织化学染色、乳酸脱氢酶(LDH)同工酶谱、细胞周期检查、核型分析、异种移植。结果　建立细胞系SOSP-9607，其形态学表现、组织化学染色、LDH同工酶谱等均符合成骨肉瘤的特征。经1年体外培养，已连续传代120次，细胞倍增时间29.8h，细胞周期测定G1期为48.2%、G2期为20.9%、S期为30.9%。染色体具有亚三倍体核型，众数为64～66条。异种移植成瘤率100%，无支原体污染。结论　人成骨肉瘤细胞系SOSP-96

2、07可用于对成骨肉瘤的研究。　　EstablishmentandbiologicalcharactersofahumanosteosarcomacelllineSOSP-9607　　【Abstract】ObjectiveToestablishahumanosteosarcomacellline.MethodsThespecimenswhichwereidentifiedasosteosarcomawereculturedprimarilyinvitro.Thesurvivingcellsunderwentmorphologicalobservation,histochemic

3、alstaining,isoenzymepedigree(LDH)determination,9cellcyclinganalysis,karyotypeanalysisandheterotransplantation.ResultsThenewlyestablishedcelllineSOSP-9607wasmaintainedincontinuouscultureforover120transfergenerationsin1year.Morphologicalobservation,histochemicalstainingandLDHisoenzymepedigree

4、revealedthatSOSP-9607hadthecommonfeaturesofosteosarcoma.Thecellcycleanalysisshowed:G148.2%,G220.9%,S30.9%.Thedoublingtimeofcellswasabout29.8h.Thechromosomeanalysisshowedahypotriplaidfeaturewithamodelnumberofaround64～66.Thecellsremainedfreeoffmycoplasmaandthetumorformationratioofheterotransp

5、lantionwas100%.ConclusionTheSOSP-9607appearedtobeacelllinederivedfromhumanosteosarcomacellsandcouldbeusedasamodelforfurtherstudyonosteosarcoma.　　【Keywords】Sarcoma,osteogenic;Cellline;Karyotyping　　我们新建立1株人成骨肉瘤细胞系SOSP-9607，体外已传120代，可用于对成骨肉瘤的研究，现将其建系过程及其生物学特性报道如下。材料与方法9　　1.组织来源、建系：男性17岁患者，1996

6、年7月16日因左胫骨上段成骨肉瘤行左大腿高位截肢术，截肢标本取材，病理诊断成骨肉瘤(软骨母细胞型)。肿瘤标本用Hanks液冲洗数次。剪成直径1mm左右的小块后，再反复冲洗，贴壁接种于培养瓶底，底面朝上，同时加入含体积分数为20%小牛血清及常规量青、链霉素的RPMI1640培养液4ml，置37℃培养箱内，2h后缓慢将培养瓶翻转。3d后见有细胞晕生长，定期半量换液，反复清除成纤维细胞。1月后1∶2传第1代。此时细胞处于一个生长相对缓慢期，半个月后传第2代。至第4代时，细胞渐迅速生长，以后4～5d传代1次，至1997年9月，细胞已传120代，性质稳定。冻存复苏后，台盼蓝拒染活细胞在

7、90%以上。　　2.细胞形态：将生长于盖玻片上的单层细胞以体积分数为95%乙醇固定，行HE染色，光镜观察。另将细胞以体积分数为2.5%戊二醛固定，常规方法处理，行扫描和透射电镜观察。　　3.生长特性：取第44代细胞培养测定生长曲线、倍增时间、分裂指数、贴壁率［1］。9　　4.组织化学染色：将不同代数的细胞培养于盖玻片上，体积分数为95%乙醇固定，进行碱性磷酸酶(钙钴法)、酸性磷酸酶(刘氏法)染色及阿新蓝-PAS染色法显示胞浆中酸性、中性粘多糖。　　5.免疫组织化学染色：应用抗成骨肉瘤单克隆抗体2G10(