杀线虫高毒力菌株筛选及杀线虫毒素提取

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1、贵州大学硕士学位论文杀线虫高毒力菌株筛选及杀线虫毒素提取姓名：李国红申请学位级别：硕士专业：微生物学指导教师：张克勤;梁宗琦20000501致谢C是在导师张克勤教授的悉心指导下完成的。三年来，张教授在在学习上的在生活上的关心，并给予的谆谆教导和不倦教诲，不仅丰富了我的专业知】是教我做人的道理，让自己终生受益。与此同时．还得到导师粱宗琦教授《授的关心和教导，粱教授严谨的治学态度．对科学孜孜以求的待神．让我三位教授所给予的无微不至的关怀和爱护．在此表示最衷心的感谢。文化学提取部分是在云大工业微生物发酵工程重点实验宣董锦艳老师指导在此表示衷心的感谢。论文的全部研究工作在云大工业微生物

2、发酵工程重：成．并得到该室经费的资助．：和学习期间，得到莫明和、迟胜起、吴颖运、余泽芬、曹蘑、刘国琴、周I兴等同学及云大工业微生物重点实验室李蕾、刘世清、乔敏、蔡磊、束酱等老师的热情帮助，贵州大学研究生部吴宏文老师和张老师的关心和鼓励，l示感谢。：学的向红琼老师为本实验提供松材线虫，在此表示感谢。李国红二ooo年五月摘要对所收集到的74株担予菌和50株半知菌进行了对线虫Panagrellusredivivus和松材线虫∞“H印^日，enc^wxylophilus)雕J性测定，观察了高毒力菌株Kld对线虫的致病过程。并蹿箕活性组分遴行了提取分离，主要取锝以下结果：1．蛰株筛选：通

3、过平扳测定，从所收集到的124拣麓中筛选到53栋对腐生线虫(尸redivi、·m)和松材线虫(Bxylophilus)都有活性的担子菌，它们魁糙皮侧耳(PteurotusOSlreattts)、佛罗里达侧耳(P加疵出)、阿魏侧耳∽店Ⅲlae)、烈尾菇(产sajor-caju)、鑫黄铡嚣(置cornucopiae)、褴复铡耳(Itsabnoneostramineus)、l!==柄侧耳(Pspodoleucus)、众顼铡耳(Pcitrinopileatus)、裂皮侧耳(Pcorticatus)、猴头(Hericiwnerinaceus)、般孢蘑菇(Agaricusbisporus)

4、、渡侧耳(Hohenbueheliasp)、亮耳麓(Lampterom)等。在这些有活性的菌株中，对腐生线虫和松_vcessp材线虫的致蕊辜达80％以上骢莲垛分别占躲刹蕊株豹22％鞫15％。在辑测试的茁栋孛，翻嚣联(Pteu-votus)驰{0个耪38令落撩均薅这嚣耱缓生套话瞧。竞耳蓬(Lampteromyces)等三个属的菌株是首次靛现对线虫有活_I生．它们是K⋯K16、Ql’、L，其中K，。jc寸两种线虫的活性强．12小时内对两种线虫的致病率达90％以上。2。K，。辫线垒麴致病过程：经褒察，K。霹线虫豹致瘸箨凄蓠先筵分泌麓缓史肖活性的物质将线虫击倒，然精菌丝缦入血体．最终将

5、线斑分解。这与衡j鲜褥菌株对线虫的侵染过程一致。但与侧耳属菌株相比，该茁没有产生毒累球，睬热丝上有一些瘤状突越外，该菌没有戴它特殊结构。到目前为止，避来观察到这些爝状突起与线虫致褒的豢接联系，因此扔步认为K；。砖线虫抟挥翔磷缒是莲丝基接分泌了对线虫有活性的物质．帮藩丝繇索。3．K．．发酵掖活性缎分的提取：K．。烛液体培养后，分别用发酵菌熊体羊lI发酵液测定对线虫豹话性。经测定发现其对线虫有活性的组分存在于发酵液中，对光、热等不敏薅，巍生藏稳定，不嚣要线虫诱譬。蠲不嗣较毪的蠢壤溶荆避纾攀敬，其对线虫有活性的缀分存在于水层中，为农溶性。通过离子变换树腊。对发酵液活性组分进行分离提取

6、，获得一个对这两种线．呶都有活性的结晶，但活性很弱，对该结晶进行了红外鉴定，由于所获得的晶体对线虫活性弱，在剩余发酵液中还保持着对线虫较强静灞投，霞毡认为K。发酵渡中对线虫商话蛙缀分为混台组分，避有碡于寻找台适的方法对该缀分避行受深入的捷取分离。关键词：糖子菌线m活性测定活性组分提取前。_00闫植物线虫病窖对农作物造成的危密，日益受到入ff】的重褫。根据黄国国赫躐虫研究项舅对70多个国家的调焱，1984年线虫在40种作物上的危害占调畿数的123％，所造成的损失估计超过1000亿夔元(萨塞，1992)。我国松材线虫对松椿的危害，披捺燕“蠢媛熬豢抟火灾”，已gl起匡家熬毫艘熏褪。如

7、侮有效糖治植掳瘸原线虫，诚受到人们的关注。目前，对植物病原线虫普谪的防治方法有轮作、选育抗馁晶静、瑶弯纛瘸蓥帮纯学茨港等。其孛轮终燕一矮较骞效懿措燕，键其茨浚效果取决于用于轮作作物的抗性水平和种植这些作物的时间长短，翻而有很大的局限性；抗往品释选育周期长，蠢栽培一段时闻瑟，大部分逐湃叉成为慰线虫感癌鹩熬释：化学防治能起到良好的防治效果，但由于使用杀线剂所造成的环境污染问题以及其对生态平衡的破坏，使其应用甏判了敲翻。因此生物防治线虫成为线嫩防治一个有穗望的德径，利用线虫哭敌对线虫进行生物黔治，