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1、A文档6螺旋藻1.名称：螺旋藻中提取藻蓝蛋白2.提取方法:将螺旋藻粉与中性磷酸盐缓冲液充分搅拌混匀,冻融2-4次离心得滤液→冰冻除水,加硫酸铵,沉降5-8h,离心得蛋白粗品→将蛋白溶于去离子水,透析→冰冻除水,喷雾干燥得藻蓝蛋白3.规模:实施例1实施例2实施例3实施例4实施例5螺旋藻粉质量1kg10kg20kg1kg1kg磷酸钾缓冲液10kgpH:7.0100kgpH:7.3200kgpH:6.910kgpH:6.810kg搅拌时间2h2h3h3h1h冻融次数和离心时温度2次20℃2次15℃2次2
2、0℃3次20℃4次20℃冷冻速度4℃/h5℃/h6℃/h5℃/h5℃/h冷冻恢复温度至20℃20℃20℃15℃18℃硫酸铵加入质量400g4000g8000g400g400g沉降时间6h6h6h7h8hA文档6螺旋藻1.名称：螺旋藻中提取藻蓝蛋白2.提取方法:将螺旋藻粉与中性磷酸盐缓冲液充分搅拌混匀,冻融2-4次离心得滤液→冰冻除水,加硫酸铵,沉降5-8h,离心得蛋白粗品→将蛋白溶于去离子水,透析→冰冻除水,喷雾干燥得藻蓝蛋白3.规模:实施例1实施例2实施例3实施例4实施例5螺旋藻粉质量1kg10
3、kg20kg1kg1kg磷酸钾缓冲液10kgpH:7.0100kgpH:7.3200kgpH:6.910kgpH:6.810kg搅拌时间2h2h3h3h1h冻融次数和离心时温度2次20℃2次15℃2次20℃3次20℃4次20℃冷冻速度4℃/h5℃/h6℃/h5℃/h5℃/h冷冻恢复温度至20℃20℃20℃15℃18℃硫酸铵加入质量400g4000g8000g400g400g沉降时间6h6h6h7h8hA文档6螺旋藻1.名称：螺旋藻中提取藻蓝蛋白2.提取方法:将螺旋藻粉与中性磷酸盐缓冲液充分搅拌混匀
4、,冻融2-4次离心得滤液→冰冻除水,加硫酸铵,沉降5-8h,离心得蛋白粗品→将蛋白溶于去离子水,透析→冰冻除水,喷雾干燥得藻蓝蛋白3.规模:实施例1实施例2实施例3实施例4实施例5螺旋藻粉质量1kg10kg20kg1kg1kg磷酸钾缓冲液10kgpH:7.0100kgpH:7.3200kgpH:6.910kgpH:6.810kg搅拌时间2h2h3h3h1h冻融次数和离心时温度2次20℃2次15℃2次20℃3次20℃4次20℃冷冻速度4℃/h5℃/h6℃/h5℃/h5℃/h冷冻恢复温度至20℃20℃
5、20℃15℃18℃硫酸铵加入质量400g4000g8000g400g400g沉降时间6h6h6h7h8h去离子水质量900g10kg65kg800g1100g透析袋分子截流量12kd12kd12ku12kd12kd透析时间12h12h12h10h11h含量58%63%55%56%58%7螺旋藻1.名称：一种螺旋藻蛋白及其提取方法2.提取方法：螺旋藻粉悬浊液反复冻融并机械破碎得螺旋藻细胞破碎液→用30%和50%硫酸铵分级盐析沉淀细胞破碎液得藻蓝蛋白粗提液1→加入PEG20000和NaCl沉淀出藻蓝蛋
6、白粗提物→用磷酸盐缓冲液溶解粗提物得藻蓝蛋白粗提液2→粗提液2用PEG20000/Na2SO4双水系萃取，下相经透析除盐可得藻蓝蛋白精提液，冷冻干燥的藻蓝蛋白成品3.规模：步骤特征步骤1螺旋藻悬浊液比例：螺旋藻粉：盐酸缓冲液=0.04g-0.05g：1ml（0.01mol/L，pH：7）步骤2冻融破碎三次：4-10℃静置4-8h后-15--25℃冰冻，冰块绞碎，再次以以上温度反复冻融破碎直至三次，离心转速：6000-9000rpm，时间20-30min步骤3硫酸铵分级沉析：硫酸铵溶解至破碎液之30
7、%饱和度，4-10℃静置12-15h，9000-12000rpm离心20-30min取上清，再加入硫酸铵之50%饱和度，4-10℃静置12-15h，9000-12000rpm离心20-30min取沉淀步骤4PEG20000-NaCl组分：20%（w/v）PEG20000和0.8mol/L，4-10℃静置12-15h，离心速：9000-12000rmp时间：20-30min步骤5PEG20000/Na2SO4双水相体系：10.5%（w/w）PEG20000，5.9%（w/w）Na2SO4和0.2mo
8、l/L，分配平衡1-2h，5000-7000rpm离心20-30min分相步骤6透析除盐：将下相溶液置于透析袋透析30-40h，换5-7次透析袋成品特征羟自由基半清除率IC50=0.19mg/ml，DPPH半清除率IC50=0.296mg/ml，荧光强度与计量成比例，650nm有最大荧光发射峰11节旋藻1.名称：一种节旋藻蛋白的分离纯化方法2.提取方法：藻粉1kg在PBS中充分浸泡，混匀后常温避光放置24-72h离心得上清液→上清液超滤浓缩，浓缩液加入甲壳胺使pH达到6.5-7.2
