色谱柱常见问题解答

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1、色谱柱常见问题解答FAQsforcolumnusersByCSDAEs1.液相色谱柱柱压升高问题造成柱压升高的可能原因有很多。一般是由于色谱柱筛板或柱头发生了堵塞，造成流动相阻力加大所引起。当然色谱系统其他部分发生堵塞，也可能表现为柱压（系统压力）升高。所以在发现系统压力升高时，可首先使用两通短接色谱柱观察相同条件下系统本压是否正常，排除压力升高为系统其他部分造成。•色谱柱筛板堵塞，这往往是由于流动相没有过滤，或虽已过滤但滤膜孔径过大或滤片损坏，使固体杂质滞留在筛板上造成的。可采用反冲的方法去除堵塞物。对于5或3.5um填料的色谱柱，建议

2、采用0.45um膜厚过滤样品，1.8um填料的色谱柱，请采用0.2um膜厚过滤样品。•同样类似堵塞也会发生于排气阀过滤芯、在线过滤器和保护柱，这时建议更换滤芯，在线过滤器内的筛板或保护柱内的柱芯。•非特异性吸附当部分组分在柱子上有较强的非特异性吸附，且当前所用的流动相难以将它们洗脱时，强保留组分的累积则会造成阻力增大和压力升高。可使用适当的溶剂冲洗以除去吸附物质。•样品的沉淀当样品所用的溶剂与流动相不一致时，样品进入柱中时有可能因溶解度降低而沉淀出来，造成压力升高。此时建议使用对样品有较高溶解度的溶剂冲洗。•盐晶体的析出使用较高浓度的缓冲

3、液或添加有缓冲液的流动相后，如果冲洗不彻底，缓冲液中的无机盐成分可能会残留在体系之中。它们会因在新流动相体系中溶解度降低而析出，造成流动相阻力加大，压力升高。•更换流动相时置换不彻底当改换流动相体系时，不彻底的更换使不同性质、互不相溶的流动相存在一个体系中，也会造成压力升高。可使用混溶的溶剂（异丙醇）彻底冲洗。备注：安捷伦液相色谱柱冲洗建议反相色谱柱用以下溶剂至少各25mL冲洗色谱柱(分析柱)•不含缓冲盐的流动相•100%甲醇•100%乙腈•75%乙腈+25%异丙醇•100%异丙醇•100%二氯甲烷*•100%己烷**若使用己烷或二氯甲烷

4、冲洗色谱柱,则在重新使用反相流动相以前,必须用异丙醇冲洗色谱柱!!!正相色谱柱用以下溶剂至少各50mL冲洗色谱柱(分析柱)•50%甲醇+50%三氯甲烷•100%乙酸乙酯除有特殊说明外，安捷伦的液相色谱柱在柱头发生堵塞时可以反冲。2.液相色谱柱保留时间变化保留时间不重现可能由多种因素引起，通常还会影响到峰面积的重现性，建议检查以下几个方面：•确认流动相是新鲜配制的，比例没有错误。比如一些挥发性的溶液，如乙酸，最好及时更换。•确认色谱条件在色谱柱使用范围之内,如pH范围、温度、压力。•仔细观察柱前压的变化，如果压力稳定，就可以判断泵的系统没有

5、问题；如果是压力不稳定，一定会影响保留时间，这种状况通常是由于泵头里有气泡造成的。请将流动相仔细脱气，并排出泵内气泡。•观察色谱峰形、柱效变化情况，确认色谱柱是否被污染，如果确定色谱柱污染，可尝试使用适当溶剂冲洗。•如果同时伴有色谱柱柱压升高，解决方法请参见“液相色谱柱柱压升高”部份。•如果使用梯度洗脱方法，请确认平衡时间足够长。流动相中使用离子对试剂（烷基磺酸钠等）或固定相为正相硅胶等，往往需要更长的平衡时间。•确认样品是否过载，减少进样量（进原进样量的10%确认）。•组分在色谱柱中保留不够。调整色谱条件，使样品在柱上适当保留。3.气相

6、色谱峰拖尾、响应低甚至不出峰的主要原因A)系统污染、惰性下降系统惰性不好对活性组分峰形及响应的影响尤为明显。建议选用惰性优异的低流失色谱柱和色谱耗件，如去活的衬管。如果系统已经被污染，应及时对进样口和检测器进行维护。恢复被污染色谱柱的方法主要有：将进样口端截去0.5~1米，根据样品来源做进一步的判断，如果是半挥发污染物，还可以进一步考虑对色谱柱进行老化。污染严重时可截去更长或用溶剂彻底清洗色谱柱（必需是交联键合固定相）B)色谱柱安装不正确或系统其他部位存在死体积毛细管柱在进样口和检测器的安装位置不当将影响峰形，请严格按照仪器的使用说明正确

7、安装色谱柱。其他与毛细管柱相连接的部位也应注意降低死体积。C)系统漏气需定期检查系统气密性、更换进样口备件。使用非纯石墨密封圈时，注意安装后的几次温度升降之后追加一次拧紧。D)方法条件不佳对于低挥发性样品，需注意提高进样口和/或检测器、色谱柱、传输管线等处的温度，防止冷凝现象。有些样品在某些检测器的响应确实不高（甚至没有响应），如果样品不出峰，又没有参考响应值，应加大进样量确认出峰位置，并利用标样考查样品的响应值。E)其他可能导致峰拖尾的原因：•不分流模式下，分流放空阀开启过晚（通常应在0.5~1.0分钟之间）•手动进样速度过慢•检测器尾

8、吹气流量不足•PLOT色谱柱样品过载•组分共流出•含磷化合物在NPD白色铷珠上易拖尾，建议使用黑色铷珠。4.液相分析样品前处理进样上柱的样品必须是可重现的均质溶液，样品前处理是为了尽可能除掉对