《体外评价体系介绍》PPT课件

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1、化妆品检验中心体外评价体系简介体外评价体外评价是指在活生物体之外的环境中利用细胞、模拟活生物体模型等平台进行的评价。在生物评价领域中，体外评价具有以下方面的特点1、符合“3Rs”原则（Reduction，Refinement、Replacement）2、检测结果的稳定性好、再现性高3、可为临床评价提供有效的技术支持体外评价体系的构成评价项目的确立1评价内容的分析2评价方案的建立3最佳评价平台及方法的筛选4安全性评价5功效性评价6评价结果7安全性评价项目1、刺激性评价作为动物刺激性实验的代替法，使用3T3细胞

2、分析评价被检物质的毒性指标。兔角膜细胞SIRC2、眼粘膜刺激性评价向兔角膜细胞SIRC添加被检物质，确认刺激性效果，再与标准品对比进行刺激性强度的评价3、细胞毒性评价向细胞添加被检物质，确认其对细胞的损伤情况，判断其毒性作用。4、光毒性评价（UV照射）对经过被检物质处理过的BALB/c3T3小鼠成纤维细胞进行UVA照射后，以细胞摄取中性红为指标测算出细胞存活率，确定50%细胞毒性的被检物质浓度（TC50）。通过UVA（+）、UVA（-）照射时的TC50应用下列公式计算出PIF值（PhotoIrritantF

3、actor）、MPE值可对被检物质的光毒性潜能进行评价。可以对单一成分和成品进行评价。UVA(-)UVA(+)样品浓度增加细胞生存率降低1、抗氧化应激作用评价氧化应激（OxidativeStress，OS）是指破坏了强氧化剂和抗氧化剂的平衡导致的潜在伤害，氧化剂、抗氧化剂平衡的破坏是细胞损伤的主要原因。皮肤作为机体最外层的保护层，不可避免的受到紫外线与刺激物的作用，使皮肤细胞内的活性氧（ReactiveOxygenSpecies,ROS）过多增加，诱发氧化应激作用，成为引起人体细胞老化的潜在因素。功效性评价

4、项目人体皮肤细胞中氧化应激作用的形成原因①紫外线照射（UVA、UVB）②过多活性氧的累计（•OH、O2-•、H2O2、1O2）③过氧化脂质（氧自由基与多聚不饱和脂肪酸反应的产物）抗氧化应激作用的评价评价方法：对细胞进行氧化应激刺激，添加被检物质，通过对细胞生存率的分析来评估被检物质对氧化应激作用的预防与治疗作用。评价项目：评价消除由下列因素诱发的氧化应激作用的效果①UVA、UVB照射②抗活性氧（•OH、O2-•、H2O2、1O2）③过氧化脂质评价平台：正常人体表皮角质形成细胞正常人体皮肤成纤维细胞被检物质添

5、加时间点：氧化应激刺激前氧化应激刺激中氧化应激刺激后角质形成细胞成纤维细胞2、抗衰老作用评价皮肤的衰老通常分为内在性老化和外源性老化。内在性老化见于暴露和非暴露部位，明显的特征为皱纹和皮肤松弛，表现为表皮、真皮变薄，表皮真皮连接处变平、弹性纤维和胶原纤维减少等情况。外源性老化主要发生在皮肤内在性老化的基础上，常由紫外线等引起，见于面部、颈脖和前臂等光暴露部位，表现为粗深的皱纹、异常的色素沉着、毛细血管扩张等。抗衰老是国内外美容皮肤病学研究的热门主题，对于抗衰老作用的评价，本实验室采用国际通用综合评价模式（体

6、外评价+人体评价）。在体外对被检物质的抗衰老效果进行评价，取得的评估结果可为人体评价提供参考依据。评价平台：正常人体表皮角质形成细胞正常人体皮肤成纤维细胞化学反应检测①促进胶原蛋白合成作用评价表皮基底层真皮皮肤基底层附近胶原蛋白示意图4型胶原蛋白7型胶原蛋白1型胶原蛋白1型胶原蛋白：存在于真皮的细胞外基质中，形成三股螺旋结构4型胶原蛋白：多数存在于真皮与表皮之间的基底层中，起到支撑基底层结构的作用7型胶原蛋白：以环状结构与基底层相连接，维持真皮基质的结构对被检物质是否能提高人体皮肤成纤维细胞的1型胶原蛋白合

7、成作用进行评价。伴随年龄的增加及外界环境的影响，皮肤内的1型胶原蛋白含量会减少，从而形成皱纹和皮肤松弛。本评价项目，通过向人体皮肤成纤维细胞添加被检物质后，测定细胞内1型胶原蛋白合成量（ELISA法），根据结果评定被检物质是否具有促进胶原蛋白合成的作用。②胶原酶活性阻碍作用胶原酶是一种能水解胶原蛋白的三维螺旋结构的分解酶。体内胶原酶会随年龄的增加以及外界环境的作用下，促进其活性的增加，从而加速其对胶原蛋白的分解，破坏皮肤结构，出现皱纹、皮肤松弛等皮肤衰老迹象。让胶原酶与添加了被检物质的胶原蛋白反应，测定胶原

8、蛋白的分解程度，通过实验结果分析被检物质是否具有阻碍胶原酶活性增加的作用，评估被检物质的衰老作用。③弹性蛋白酶阻碍作用弹性蛋白酶作用是分解维持肌肤张力的弹性蛋白。随着年龄增加、过多活性氧的堆积促进弹性蛋白酶分解弹性蛋白，是形成皮肤衰老的因素之一。因此，阻碍弹性蛋白酶活性，可恢复肌肤张力，起到抗衰老的作用。让弹性蛋白酶与添加了被检物质的弹性蛋白反应，测定弹性蛋白的分解程度，通过实验结果分析被检物质是否具有阻碍弹性蛋