肝脏特异性miR122在obob小鼠血清中的变化及其病理学作用的研究

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1、萄菇大凄研究生毕业论文(申请硕士学位)肝脏特异性miR．122在ob／ob小鼠血清中的变化及其病理学作用的研究”作者：李鹏导师：项阳教授南京大学生命科学院2011年5月Dissertationfo厂MasterDegreeStudyonthevariationofliver-specificmiR--122intheserumofob／obmouseanditspathologicfunctionsByPengLiSupervisor：Prof．YangXiangSchoolofLifeSciencesNanjingUniversityMay，2011南京大

2、学硕士论文生堡堂专业2QQ墨级硕士生姓名：奎鹏摘要研究背景／研究目的：MicroRNAs(miRNAs)是一类在转录后水平调节靶基因表达的非编码小RNA分子。最近研究发现，细胞分泌的miRNAs作为一种新型的信号分子能够介导细胞之间的相互作用，microvesicles(MVs)也被证实是循环系统miRNAs运输的一种有效载体。课题组前期研究发现，2型糖尿病动物模型ob／ob小鼠的血清中miR．122的含量显著升高，本文进一步研究ob／ob小鼠血清中miR-122升高的原因及其在2型糖尿病发病过程中的作用及意义。研究方法：采用qRT-PCR技术检测C57BL

3、／6J和ob／ob小鼠血清及肝脏中miR．122的表达水平；原代培养BALB／c小鼠肝细胞，高脂刺激后检测其分泌的MVs中miR．122含量的变化；qRT-PCR定量比较C57BL／6J小鼠和ob／ob小鼠脑组织中miR．122和pre．miR．122的表达水平；以miR．122分子转染293T细胞后收集其分泌的MVs，经qRT-PCR检测确认后采用特异性荧光染料DiI．C18标记MVs，不同剂量尾静脉注射到BALB／c小鼠体内，不同时间点取脑组织做冰冻切片，在荧光显微镜下进行病理学形态学观察，同时qRT-PCR定量分析其脑组织中miR-122含量的变化；W

4、esternblotting和qRT-PCR分别检测miR．122靶基因PPAR．0【的蛋白及mRNA在C57BL／6J小鼠和ob／ob小鼠肝脏和脑组织中的水平。研究结果：(1)研究发现ob／ob小鼠血清中miR．122的含量是正常C57BL／6J小鼠血清含量的4．6倍，高于体外经高脂刺激后小鼠原代肝细胞分泌的MVs中miR．122含量增长的倍数，提示血清中的大部分的miR．122以MVs包裹的形式存在。(2)与C57BL／6J小鼠相比，ob／ob小鼠肝脏中miR．122的含量显著下降，南京大学硕士论文提示肝细胞能选择性的将miR．122包裹到1V[Vs中，

5、并在高脂环境中将MVs主动释放到循环系统中发挥一定的功能。(3)定量检测ob／ob小鼠脑组织中miR．122的表达水平是C57BL／6J小鼠脑组织中的1．67倍，而C57BL／6J小鼠和ob／ob小鼠脑组织中pre．miR．122的水平却没有明显差异。同时miR．122转染的293T细胞所分泌的MVs经尾静脉注射到BALB／c小鼠体内，12h后发现小鼠脑组织中miR-122的含量是注射生理盐水对照组的2．25倍；脑组织切片中也观察到DiI．C18标记的MVs尾静脉注射BALB／c小鼠后的特异性荧光显示，结果表明含肝脏特异性miR．122的MVs可以进入脑组织

6、。(4)Westemblot分析发现PPAR．q蛋白在ob／ob小鼠肝脏中的表达水平显著高于在C57BL／6J小鼠肝脏中的表达，说明肝脏中miR．122含量的下降能够导致PPAR．0【蛋白表达的增加；ob／ob小鼠脑组织PPAR．Q蛋白表达下降，提示ob／ob肥胖小鼠脑中升高的miR．122可能抑制了PPAR．a蛋白的表达。qRT-PCR的结果显示C57BL／6J小鼠和ob／ob小鼠肝脏和脑组织中PPAR．0【mRNA的水平均没有明显差异，说明miR．122可能是在蛋白水平而不是在mRNA水平上调控PPAR．Q的表达。结论：高脂环境下肝细胞能够选择性的将mi

7、R．122包裹到MVs中并将其分泌到细胞外，导致ob／ob小鼠血清中miR．122水平升高而肝脏中miR．122含量下降；肝脏分泌的miR．122作为一种信号分子在ob／ob小鼠病理生理过程中发挥重要作用，并可能通过PPAR．伐通路促进了胰岛素抵抗和2型糖尿病的发生和发展。关键词：miR．122；microvesicles(MVs)；PPAR．c【；2型糖尿病II南京大学硕士论文SPECIALIZATION：Physiology_．POSTGRADUATE：Li里塑gAbstractBackground／Aims：MicroRNAs(miRNAs)areac

8、lassofnoncodingRNAsthatreg