血管内皮细胞对胶质瘤侵袭性生长的影响及其与Notch信号通路关系

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2、的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所和中国学术期刊(光盘版)电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)功．～—少学位论文作者签名(手写)：同榜昊导师签名(手写)：形羽№^A签字日期：1o／z年6月为日签字日期：

3、汨；年6月锣日摘要IIYW2lll4llillll217Wt2tlllllollllllollUlY2427200研究背景和目的：胶质瘤是最常见而又最难治愈的中枢神经系统恶性肿瘤，占成人颅内肿瘤的50％，手术治疗难度大，术后复发率高【l。2J。过去几十年间，尽管手术方法不断改进及放疗、化疗、免疫疗法、基因疗法等多种辅助疗法的综合应用，临床疗效取得一定进展，但其总体预后改善欠佳。胶质瘤无论分化高低均具有浸润性生长、富血管化、无包膜形成的生物学特性【3J。一般认为胶质瘤的高侵袭性、富血管化及肿瘤细胞与

4、血管内皮细胞的相互作用影响正是胶质瘤难根治、易复发的根本原因【4J。有研究表明，胶质瘤的侵袭性生长与其所处的微环境密切相关[5-6]。血管内皮细胞与胶质瘤细胞的相互作用可促进胶质瘤的侵袭生长【8】，但其具体机制不明。Notch信号通路在中枢系统发育及新生血管生成过程中均发挥关键作用，Notch信号的激活与血管新生和胶质瘤细胞增殖关系密切[91。由此我们提出假设，在血管内皮细胞促进胶质瘤的侵袭迁移过程中，Notch信号通路可能起着重要的调控作用。我们拟通过观察血管内皮细胞对胶质瘤细胞侵袭力的影响及N

5、otch信号通路相关因子在其中的相应变化情况来探讨血管内皮细胞对胶质瘤细胞侵袭性生长作用的相关机制。研究内容和方法：1、在体外建立人脑胶质瘤母细胞U87及人脐静脉内皮细胞(HUVECs)共培养模型：将U87及HUVEC细胞均置于含10％胎牛血清的DMEM培养基中培养，在37℃、5％C02、湿度95％的恒温培养箱孵育。按实验要求将细胞分组，分别为单独培养U87细胞培养组，U87细胞与血管内皮细胞正常共培养组和DAPT阻断血管内皮细胞Notch信号通路与U87细胞共培养组。2、观察血管内皮细胞对胶质瘤

6、侵袭性生长的影响。在体外利用Transwell共培养系统对人脐静脉内皮细胞和胶质瘤细胞U87进行共培养，采用体外快速侵袭力测定法检测胶质瘤细胞侵袭力在不同状态的血管内皮细胞作用下的变化。3、Real．TimePCR检测不同培养状态胶质瘤U87细胞CathepsinsB、MMP．9、MMP．2、Notch．1、Notch．2、Hes．1、D114基因表达。在体外利用Transwell共培养系统对人脐静脉内皮细胞和U87胶质瘤细胞进行共培养，使用荧光定量PCR检测共培养组的U87细胞的Notch基因及

7、相关侵袭因子的表达与单独培养条件II摘要下比较的变化情况；4、观察不同培养状态下胶质瘤细胞体外血管拟态现象结果1、发现与血管内皮细胞共培养时，可致胶质瘤细胞U87侵袭力增加，而当阻断血管内皮细胞Notch信号通路后，可降低胶质瘤细胞的侵袭力增加幅度。穿膜数量分别为单独培养组40．0士3．92个，正常共培养组平均81．5+2．89个，DAPT抑制组为61．8+4．72个(P<0．05)。2、RT-PCR结果显示，与血管内皮细胞共培养后，胶质瘤细胞的CathepsinsB、MMP．9、Notch．1、

8、Notch．2、Hes．1、D114基因mRNA表达上调，阻断血管内皮细胞的Notch信号通路后，CathepsinsB、MMP．9、Notch．1、Notch．2、Hes．1基因的上调幅度受限(P均<0．05)，但DLL4无明显改变，而各组间MMP．2基因的表达无明显异同，不具有统计意义。其中NotchlmRNA的2。△△cT分别为1、6．87、1．82；Notch2mRNA的2。雠T分别为l、22．78、14．52；HeslmRNA的2-AACT分别为1、3．89、3．20；M