NF-κBTNF-α信号通路对小鼠侵袭性肺曲霉病的影响

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1、摘要摘要目的：研究烟曲霉菌感染的正常小鼠和IPA小鼠的肺组织胞核NF．r．B和胞浆TNF．a的早期表达水平与抗烟曲霉菌的关系，以及对侵袭性肺曲霉病的发病影响。方法：lIPA模型小鼠的建立将BALB／c清洁级小鼠160只随机分为四组，每组40只小鼠。A组正常组；B组免疫抑制组(注射环磷酰胺)；C组正常媚曲霉菌接种组(接种烟曲霉菌)；D组IPA模型组(注射环磷酰胺并接种烟曲霉菌)。B、D组小鼠腹腔注射环磷酰胺，A、C组腹腔注射等量的生理盐水。C、D组小鼠鼻腔吸入烟曲霉菌感染小鼠。接种烟曲霉菌8h，24h,48，72h各时相点，取血液，处死小鼠，无菌取脾脏、

2、胸腺和肺组织，采用血液白细胞计数、肺组织MPO值、胸腺指数、脾脏指数、菌落计数的测定和肺组织的病理学观察等指标，对IPA模型小鼠的建立进行评价。2Westernblot测定小鼠肺组织胞核NF-r．Bp65蛋白和胞浆TNF-ct蛋白的表达取出接种烟曲霉菌8h～72h各时相点小鼠肺组织，分别提取肺组织胞核蛋白和总蛋白。样品蛋白经SDS--PAGE电泳，电泳分离的蛋白条带转膜。将转有蛋白的膜进行免疫反应，分别与相应一抗、二抗杂交以检测胞核蛋白NF-’①p65、胞浆TNF．0t和作为内参的13-actin蛋白，ECL化学发光后对胶片进行曝光，将胶片上的蛋白条带

3、进行扫描，用图象分析软件对目标带进行半定量。3小鼠肺组织MPO值测定取肺组织100mg加0．5％CTAB溶液2mL，用玻璃匀浆器制备匀浆，超声粉碎亚细胞成分(50瓦10秒，共5次)。于40C以120009离心20min。取0．1mL上清加反应液2．9mL。保持温度250C，立即置分光光度计在460rim波长下进行2分钟时间扫描。以第30秒到第90秒的1分钟内吸光度的变化代表酶活力的改变。l单位MPO活力以250C分解lmmolH202来表示。结果：1、IPA模型小鼠的建立IPA组小鼠吸入烟曲霉孢子后8h-72h，腹腔注射环磷酰胺的免疫抑制组小n摘要鼠中

4、血液白细胞计数、肺组织MPO值、胸腺指数、脾脏指数均显著低于正常组小鼠(P

5、点，正常+接种烟曲霉菌组和IPA模型组小鼠肺组织胞核NF．r．B和胞浆TNF．a表达均显著高于正常组(P

6、孢子感染早期可以活化小鼠肺组织细胞中的NF．F,B蛋白，上调肺组织细胞核中的NF．KBp65，促进小鼠肺组织细胞内TNF-a蛋白的表达。4、本研究揭示了小鼠腹腔注射环磷酰胺可以显著地降低肺组织胞核NF．KBp65和胞浆TNF吨生理性表达水平，是肺组织烟曲霉菌孢子感染演化为IPA的分子机制之一。关键词：NF．r．B；TNF．Q；烟曲霉菌；侵袭性肺曲霉病；信号通路；nlAbstractABSTRACTObiective：TostudytherolesthatearlyexpressionsofnucleusNF-心andcytoplasmic1’NF-ai

7、nthelungofnormalmiceandIPAmodelmiceinfected埘tllAspergilusfumigatusplayedontheanti·infectionofAspergilusfumigatusandtheireffectsonthepathogenesisofinvasivepulmonaryaspergillosis．Methods：1TheestablishmentofIPAroodelmice：160BALB／cmiceweredividedinto4groups(40miceeachgroup)．GroupA：H

8、ealthygroup；GroupB：immunosuppressivegroupinject