胶原酶与TIMP1表达变化及其在COPD大鼠肺结构重塑中的作用

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1、重庆医科大学硕士学位论文胶原酶与TIMP-1表达变化及其在COPD大鼠肺结构重塑中的作用姓名：陈涛申请学位级别：硕士专业：内科学（呼吸）指导教师：吴亚梅2003.6.1重庆医科大学硕士学位论文英文缩写COPDECMTIMP．1MMPsFVCFEV0．3RiReBALFDABPBS1YisEDTATBEOligodNTPPCRTaqImPCR中英文对照及缩写英文全称chronicobstructivepulmonarydiseaseextralcelluarmembranetissueinhibitorofmetalloproteinase-1met

2、alloproteinasesforcedvitalcapacitythe0．3secondofforcedexpiratoryvolumeresistanceofinspirationresistanceofexpirationbronchoalveolarlavagefluiddiaminobenzidinetetrahydrochloridephosphatebuffersolutiontrishydroxymethylaminomethaneethylenediaminetetraaceticacid1一s一130ricacid．EDTAo

3、ligonucletidedeoxynucleosidestriphosphatePolymeraseChainReactionthermosaquaticus(DNApolymerase)ReaversetranscriptionandpolymeraseChainreaction+l一中文对照慢性阻塞性肺疾病细胞外基质组织金属蛋白酶抑制剂一1基质金属蛋白酶用力肺活量第0．3秒呼吸容量吸气阻力呼气阻力支气管肺泡灌洗液四盐酸二氨基联苯胺磷酸盐缓冲液三羟甲基氨基甲烷乙二胺四乙酸三羟甲基氨基甲烷一硼酸一乙二胺四乙酸寡聚核苷酸脱氧核糖核苷三磷酸盐聚合酶链

4、反应耐热DNA聚合酶逆转录集合酶链反应重庆医科大学硕士学位论文英文缩写mRNAcDNARNAsinddH20MOD英文全称messengerribonucleicacidcomplementdeoxyribonucleicacidribonucleaseinhibitordoubledistillationwatermeansofopticaldensity一2一中文对照信使核糖核酸互补脱氧核糖核酸核糖核酸酶抑制剂双蒸水平均光密度重庆医科大学硕士学位论文胶原酶与TIMP．1表达变化及其在COPD大鼠肺结构重塑中的作用摘要目的斗慢性气道炎症和气道重塑

5、是COPD的主要特征。基质金=i=，■__一属蛋白酶(№压Ps)及其内源性抑制因子一组织金属蛋白酶抑制剂(TIMPs)被认为是通过破坏基质的降解和沉积的平衡来参与COPD的发病。本研究拟通过建立COPD大鼠模型，了解胶原酶MMP．1、MMP．8、MIVIP．13和它们的天然抑制因子TIMP．1的表达情况，从而探讨胶原酶在COPD发病中的作用。／／方法采用10周龄Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、异丙＼托溴铵组，对于模型组和异丙托溴铵组在第1、15天均给予经气管插管气道内注入脂多糖(LPS)0．2毫克／只，其余时间在72升的密闭玻璃箱中给予5％

6、的烟薰O．5小时／次，每日两次，共32天，自第8天给予异丙托溴铵雾化，每日1次，其余两组以生理盐水替代雾化。测定肺功能及进行支气管肺泡灌洗后，取肺组织石蜡切片HE染色观察肺组织病理改变，BALF计数和分类，免疫组织化学法检测MMP．1、MMP8和TIMP．1在肺泡和支气管的表达。半定量RT-PCR检测肺组织MMP．13mRNA和TIMP．1mRNA的表达情况。结果l、同对照组比较，模型组大鼠肺组织病理切片呈现类重庆医科大学硕士学位论文似于人的COPD病理学改变，表现为小气道炎症、上皮层增厚，平滑肌层增厚显著；光镜下表现为小叶中央型肺气肿，单位面积肺

7、泡数减少，肺泡面积增大。肺功能FEVo3／FVC％降低、融、Re增加。2、与对照组比较，模型组和异丙托溴铵组的BALF中的细胞总数增加(分别为1．72士0．56、4．1士0．76、3．60-4-0．52，P<0．05)，细胞成分以中性粒细胞增加为主。异丙托溴铵组细胞数虽较模型组有下降，但无统计学差异。3、免疫组织化学检测，MMP．1、MMP．8和TIMP．1在三组大鼠支气管和肺组织均有表达，表达细胞为上皮细胞，巨噬细胞、中性粒细胞、肺实质细胞；同对照组比较，模型组和异丙托溴铵组的MMP．1、MMP．8和TIMP．1的蛋白表达增强。4、半定量RT-P

8、CR检测支气管肺组织中MMP．13、TIMP．1mRNA，发现模型组和异丙托溴铵组均较对照组升高。5、肺泡面积和肺组织MM