激素诱导风信子花芽再生相关基因的表达模式及EST分析

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1、山东农业大学硕士学位论文激素诱导风信子花芽再生相关基因的表达模式及EST分析姓名：马燕申请学位级别：硕士专业：植物学指导教师：张宪省2003.6.20Y哂687关于学位论文原创性幂j便角授权的声明本人所呈交的学位论文，是在导师指导下，独立进行科学研究所取得的成果。对在论文研究期间给予指导、帮助和做出重要贡献的个人或集体，均在文中明确说明。本声明的法律贡任由本人承担。●本人完全了解山东农业大学有关保留和使用学位论文的规定，同意学校保留和按要求向国家有关部门或机构送交论文纸页本和电子版，允许论文被查阅和借阅。

2、本人授权山东农业大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采鬲影：_，缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。，j罾论文在解密后应遵守此规定。论文作者签名：导师签名：日期：盟皇塑主：6，2。山东农业大学硕士学位论文摘要rl通过控制外源生长素和细胞分裂素的浓度，可以诱导风信子(1lyaointhusoriontalis厶CV．DeftBlue)花被片外植体定向产生各种花器官。风信子花被片外植体接种予附加2．0IIIg／l6-BA、0．1mg／12，4一D的MS培养基上，可直接诱导花

3、芽的产生。y-本研究利用风信子离体花器官再生实验系统，以在附加较高浓度外源激素(6-BA、2，4-D)的MS培养基上培养5天及10天的花芽为材料，构建起eDNA文库。通过微阵列技术对文库进行了筛选，并对筛选出的部分克隆的序列进行了分析，初步筛选出一批与激素诱导风信子花芽再生相关的克隆。。f根据初步筛选的结果，挑选4608个克隆构建表达谱。分别l；l花被片、’外植体、在附加较高浓度外源激素(6-BA、2，4-D)的Ms培养基上培养6天、10天材料的标记反转录产物为探针与之进行杂交，进一步确定某些受激素调节的

4、基因的表达模式。通过杂交分析，共获得1217个激素诱导前后表达信号发生变化的克隆。其中947个克隆(20．5％)，在外源激素诱导后表达信号增强，可能受外源激素正调控；270个克隆(5。9％)，表达信号减弱，可能受外源激素负调控。选取其中特异表达的90个克隆测序，共获得84个序列，代表77种EST序列。利用GeneBank数据库提供的信息对其同源性进行比较分析。结果表明，54个基因与植物中已知功能的基因具有较高的同源性，23个基因与植物中已知基因同源性较低或没有任何同源性。结合基因的序列及同源基因的功能信息

5、对这些可能受激素调节的基因的特征及可能的功能进行了初步的分析。马燕：激素诱导风信子花芽再生相关基因的表达模式及EST分析在此基础上，选取克隆号为26311的基因，分离其全序列。根据同源l‘性比较，26N1与水稻中推测的锌指蛋白基因具有较高的同源性。y-Northern杂交分析表明，26NI基因在接种于附加较高浓度外源激素(生长素和细胞分裂素)的MS培养基上培养l天时，其表达水平显著提高，继续培养5天、10天，15天其表达水平与培养前略有下降，而在无外源激素MS培养基上培养1天及5天，表达水平与培养前没有明

6、显变化初步推测外源激素可能快速调节嬲w基因的表达。在植株上，26NI主要在花被片、雄蕊等花器官中表达，在根中也有较强的表达信号，26NI可能参与了植物的多个发育过程。关键词：风蓓争激亲谤辱花瓶表迭暂7EST棼薪关键词：风信子激素诱导花芽苒生表达镥芬析山东农业大学硕士学位论文AbstractParticulartypeoffloralorganscanbeinducedfromtheregeneratedfloralbudsofHyacinthusorientalisbypreciselycontrolli

7、ngexogenoushormonesinthemedium．TheregeneratedfloralbudsproduceonlytepalswhenculturedonMSmediumwith2，4-D(0．1mg／1)and6-队(2mg／1)．Usingtheinvitrofloralorganregenerationsystem，weconstructedacDNA1ibrarywithfloraltissuesculturedat5daysand10daysunderhighconcentra

8、tionofauxinandcytokinin．TheeDNAlibrarywasscreenedbycDNAmicvoarraymethod．Anumberofclonesinvolvedinfloralregenerationinducedbyhormoneswereacquired．Tofurtherunderstandtheexpressionpatternsofgenesinvolvedinhormone—regul