猪繁殖与呼吸综合征基因免疫的研究

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1、内蒙古农业大学硕士学位论文猪繁殖与呼吸综合征基因免疫的研究姓名：赵永刚申请学位级别：硕士专业：预防兽医学指导教师：申之义;童光志2003.6.1摘要本实验选取猪繁殖与呼吸综合征病毒CH．1a株的保护性抗原基因及细胞因子IFNmIL一2基因构建了7种重组真核表达质粒口／1．pIRESoff5／4(表达全长ORF5、ORF4基因)：2．plRESorf6／5(表达全长ORF6、0RF5基因)：3．p／RESorf5／7(表达全长ORF5、ORF7基因)：4．plRESorf7／IFN-7(表达全长ORF7、IFN-7基因)；5．plRESorf5／IFN-7(表达全长ORF5、IFN

2、-7基因)；6．plRESoff5／IL一2(表达全长ORF5、IL．2基因)；7．plRESorf7／IL．2(表达全长ORF7、IL．2基因)。获得这7种表达质粒后，利用IIF检测在体外的表达情况，转染7种质粒的细胞及接毒细胞均可看到细胞胞浆有特异性荧光，而未转染细胞及转染pIRESlneo空载体的细胞在细胞胞浆中无特异性荧光。任意选择构建好的2种质粒plRESorf5／4、plRESorf5／7免疫BALB／c小鼠，结果表明plRESorf5／4、plRESorf5／7都能发生表达。分别用这7种重组质粒和空载体plRESlneo以及猪繁殖与呼吸综合征油乳剂灭活苗肌注30日龄

3、的断奶仔猪，采用股四头矾多点注射的方式进行7四次免疫，间隔为两网，第四次免疫后两躅，所有猪均用2．Oml的CT-T-la株强毒用滴鼻的方法进行攻毒，攻毒后每天观察并详细记录猪的发病和死亡情况，免疫及攻毒前后均采血检测抗体和外周血CD4+、CD8+T细胞的变化J夕’结果表明，构建的7种真核表达质粒都可以诱导免疫猪产生体液免疫应答和细匏免疫应答。真核表达质粒诱导的免疫应答可以使免疫猪在一定程度上抵抗强毒的致病性攻击，但不能阻止病毒的感染。免疫前各组均检测不到抗体，第～次免疫后两周开始出现抗体，第三次和第四次免疫后抗体逐步升高。用流式细胞术检测猪外周血淋巴细胞CD4+、CD8+T细胞的

4、变化，结果表明我们构建的7种真核表达质粒免疫动物后可诱导机体产生细胞免疫应答。／第四次免疫后两周用PRRSV同型强毒进行攻毒，空载体对照组、阴性对照组的猪在攻毒后20天内各有～头猪出现体温升高，体温达40℃，其余大部分猪体温维持在38．39℃。免疫组和对照组均有猪组织脏器出现不同程度的病理变化，表现出个体差异，免疫组获得了部分保护。本实验对猪繁殖与呼吸综合征基因免疫进行了初步研究，为以后进一步研究奠定了基础。久-乙～7关键词：猪繁殖g舟吸综合征病毒；真核表达质粒：基因免疫；StudyofGenevaccinationofPorcinereproductiveandrespirat

5、orysyndromeAbstractSevenplasmidsagainstPRRSV’wereconstructed．plRESorf5／4containedtheORF4andORF5genesofPRRSVCH-la．plRESorf6／5containedtheORF6andORF5genesofPRRSVCH一1a．plRESorf5／7containedtheORF5andORF7genesofPRRSVCH—la．plRESorfT／IFN-YcontainedtheORF7geneofPRRSVandporcineIFN-ygene．plRESorf5／IFN吖

6、containedtheORF5geneofPRRSVandporcine1FN-ygene．plRESorf7／／L-2containedtheORF7geneofPRRSVandporcineIL-2gene．plRESorfS,qL-2containedtheORF5geneofPRRSVandporcineIL-2gene．TheforeigngenesoftheseplasmidswereexpressedbyIIFtestoftheMarc-145cellstransfectedwiththeplasmids．TenBALB／cmicewerc蛳ectedwithpl

7、asmidsplRESorf5NandDIRESorf5／7．TheantibodiesagainstPRRSVwereidentifiedafterthesecondinoculation．Thirty-dayold,PRRSV—negativepigletsweredividedinto10groups(threepigletspergroup)，Thepigletsofeachgroupwerereceivedthesev明typesofplasmids，plRESlneo