小鼠桑葚期和囊胚期胚胎冻存方法的研究

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1、天津医科大学硕士学位论文小鼠桑葚期和囊胚期胚胎冻存方法的研究姓名：赵晓徽申请学位级别：硕士专业：妇产科学指导教师：岳天孚;随笑琳20030501天津医科大学硕士学位论文缩略语表序号缩略语英文中文lIVF—ETInvitrofertilization-体夕卜受精一Embryotransfer胚胎移植2ARTAssistedreproduction辅助生育技术technology3OHSSOvarianhyperstimulation4BSA5EG6GC7PEGsyndromeBovineserumalbu

2、minEthyleneglycolGlyceroPolyethyeneglycol8DMSODimethylsuphoxide9PROH1、2-propanedio10DPBSDulbecco’Sphosphate—bufferedsaline卵巢过度刺激综合征牛血清白蛋白乙烯已二酵甘油多聚乙烯甘醇二甲基亚砜丙二醇磷酸盐缓冲液11OPSOpenpulledstraw开放麦管2天津医科大学硕士学位论文摘要目的：研究两种冷冻保护剂乙烯已二醇(EthyleneGlycol，EG)和甘油(Glycero，GC)

3、在不同浓度和暴露时间的条件下对桑葚胚及囊胚的毒性影响；比较桑葚胚、早期囊胚和囊胚经玻璃化法(Vitrification)、EG慢速冷冻和Gc慢速冷冻三种方法冻融后胚胎继续发育的潜能：初步确定玻璃化法冷冻种植前晚发育时期胚胎的最佳阶段。方法：1．桑葚胚、早期囊胚和囊胚分别暴露于1．5MEG磷酸盐缓冲液、1．5MGc磷酸盐缓冲液20min，6．OMEG磷酸盐缓冲液5min，以暴露于不舍冷冻保护剂的磷酸盐缓冲液为对照。观察在胚胎体外培养系统M16培养液继续发育的情况。2．桑葚胚、早期囊胚和囊胚三个发育阶段的胚

4、胎均用玻璃化法、EG慢速冷冻和Gc慢速冷冻法冻存，比较三种方法冻融后胚胎继续发育的情况。3．比较三个阶段胚胎经玻璃化法冻存后冻融胚胎继续发育的情况。结果：1在1．5MEG磷酸盐缓冲液、1．5MGC磷酸盐缓冲液中暴露20min6．OMEG磷酸盐缓冲液暴露5min后，在体外培养中桑葚胚、早期囊胚和囊胚继续发育与对照组相比没有显著性差异，对胚胎没有明显毒性影响。2桑葚胚经玻璃化法、EG慢速冷冻法和Gc慢速冷冻法三种方法冻存后，冻融胚胎囊胚形成率分别为：85．7％、71．1％、48．796，囊胚孵出率分别为：5

5、9．5％、42．2％、23．1％，玻璃化法和EG慢速冷冻法高于Gc慢速冷冻法(PO．05)。三种方法冻存早天津医科大学硕士学位论文期囊胚融解后扩张囊胚形成率分别为65．体、26．2％、41％，囊胚孵出率5L4％、19％、28．2％，冻存囊胚融解后囊胚重新扩张率为43．8％、21．1％、22．5％，囊胚孵出率为29．2％、10．5％、10％。在早期囊胚和囊胚的冻存中，玻璃化法冻融后胚胎继续发育率高于EG慢速冷冻法和Gc慢速冷冻法(P

6、O．05)o结论：1．5MEG、1．5MGC溶液及6．O[-tE6在本研究采用的冷冻条件下对胚胎没有毒性影响。对于桑葚胚。玻璃化法和EG慢速冷冻法优于Gc慢速冷冻法：早期囊胚和囊胚玻璃化法冷冻效果优于E6和Gc慢速冷冻法。在慢速冷冻中，EG较Gc更适于桑葚胚。桑葚胚可能是玻璃化法冻存种植前晚发育时期胚胎的最佳阶段。关键词：小鼠桑葚胚囊胚冷冻保护剂玻璃化冷冻冻存4天津医科大学硕士学位论文StudyofmoHSenlorHla

7、eandblastOCyStScryopreServationAbStractObjective：TostudYthetoxiceffects0fthedifferel3．tCOncelltratiOil0fthetWOcyroprotectalltsandthedifferentexP0suretifileoilthemousemorulaeandblastocYstS：TocomparethedevelopmentalP0tential0f[110uSe[noi'111ae，earlyblastoc

8、ystSandblastocystscyropreNervedbyVitrificatiOil，SlO'W—freezing-ithethYleneglyC01or91ycerol：Tofil3dOHttheSragewhichcanviithstalldcYropresel,-、／atiOilbestirlthe1atedevelopmentStage0fPreimplantedlnouseeiabryo．Methed：1．Theembr