银杏叶提取物及磷酸肌酸钠对Aβ2535致PC12细胞凋亡保护作用机制研究

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1、河北医科大学硕士学位论文银杏叶提取物及磷酸肌酸钠对Aβ25-35致PC12细胞凋亡保护作用机制研究姓名：刘希奇申请学位级别：硕士专业：神经病学指导教师：张国华;杨国锋20080301中文摘要损伤PCI2细胞，12小时后予银杏叶提取物组(200mg／L)，PCr组(20mmol／L)保护细胞，培养12小时后，用线粒体膜电位特异荧光探针JC．1标记PCI2细胞，启动共聚焦显微镜，选择488nm氩离子激光和543nm氦氖激光作为激发光，选择530±15nln和615±30nm通道作为接收通道，启动计算机运行Lasersharp2000软件，扫描图

2、象，最后将图象在Laserpix软件中进行处理。同时将浓度为104／mE的细胞，以600转／分的速度进行细胞甩片后，按TUNEL凋亡试剂盒的操作步骤检测细胞凋亡，计算细胞凋亡率，采集图像。采用SPSS统计软件进行统计学分析。结果：在A1325．35浓度为30umol／L时，对PCI2细胞损伤效果明显，与Oumol／L，lOumol／L，201．tmol／L组有显著差异(P<0．01)，而和40umol／L组，差异不明显(P>O．01)。以不同浓度的银杏叶提取物及磷酸肌酸钠进行干预后，测量OD值，采用方差分析法得出EGB200mg／L组与Al

3、B30umol／L，EGB100mg／L组差异明显(P0．01)，PCr20mmol／L与AfB0umol／L，PCr10mmol／L组差异明显(P

4、PCr20mmol／L组同时处理PCI2细胞(简称为磷酸肌酸钠组，下同)后，红色荧光强度明显增强，绿色荧光强度明显降低，即线粒体膜电位(MMP)升高。Ap组(30umol／LAp)、EGB组中文摘要(A1330umol／L+EG}B200mg／L)及PCr组(A1330umol／L+PCr20mmol／L)均可见TLrNEL阳性细胞，即凋亡细胞，PO．D标记的凋亡细胞显绿色荧光；而以DAB显色，凋亡细胞核被染成棕色。A13组细胞凋亡率(63％)高于银杏组(21％)及磷酸肌酸组(22％)(p

5、325．35可诱导PCI2细胞凋亡，建立AD的细胞膜型。2．浓度为200mg／L的银杏叶提取物及20mmol／L的磷酸肌酸钠，通过提高PCI2细胞的线粒体膜电位水平，抑制细胞凋亡，提高细胞存活率，从而对A1325．35损伤的PCI2细胞起到一定的保护作用。关键词：阿尔茨海默病；13淀粉样蛋白；PCI2细胞；凋亡；银杏叶提取物；磷酸肌酸钠；保护英文摘要TheMechanismofGinkgobilobaextractandCreatinephosphatesodium’SProtectionfromApoptosisofPC-12cellsi

6、nducedbyAp25—35Objective：Thisexperimentusesamyloidp(Ap)25-35toinduceapoptosisinPC12cells，establishingthecelltypeofAlzheimer’Sdisease，andthenprovidesGinkgobilobaextractandcreatinephosphatesodiumtointervene．Toexplorewhetherthetwoplayprotectiverolesinneuronalapoptosisinducedb

7、yAIB25-35．Materialsandmethods：ChoosingthePC12cellsonthelogarithmicgrowthphase，aftercellcount，inoculatingthemsin96一wellplatesonthedensityof104／mL．Culturingcellsfor24hours，exchangeahalfofnutrientmedium，thenadddifferentconcentrationsofAp25—35(A：0Ⅳnol／L(controlgroup)、B：lOpmol／

8、L、C：209mol／L、D：30pmol／L、E：40pmol／L)．Culturingcellsfor24hours，obtainthecellsurvivalpercent