《BD流式基础知识qj》PPT课件

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1、流式细胞术ForFCMTrainingBD:钱璟2011.9.28重庆流式细胞术？对于处在流动状态中的细胞或颗粒各项特性进行检测FlowCytometryinmotioncellmeasure♠特点：速度快(≥10000cells/s)特异性强，灵敏度高(MRD:1/10000)多参数分析、活细胞分选♠研究对象:单细胞悬液可检测的样本种类多样：外周血、骨髓、细胞穿刺液、洗脱液、实体组织、培养细胞、藻类等流式细胞术FACSVerseAccuriC6LSRforttesa现代流式细胞仪(Flowcytometer)FL2PESSCFSC电子系统计算机系统

2、FL3PerCP,Cy5FL1FITCLightdetectors液流系统光学系统laser流式细胞仪工作流程流式细胞仪的构造1.细胞样本成单列依次通过光检测区液流系统2.激发并收集各种光信号3.光信号转换成电信号，数字化处理4.数字信号传入计算机光学系统电子系统计算机系统分选系统5.活细胞分选液流系统流动室（Flowcell）LaserSample流体动力学聚焦鞘液：sheathSheathSampleStreamCell样本流和鞘液流的驱动一般采用加正压的方法鞘液压力恒定，流速不变通过调节样本压力调节样本进样速率液流系统液流驱动系统调节样本进样速

3、度样本流与鞘液压力差改变，样本流直径改变，细胞间距改变10psi10psi10psi10psi10psi10.2psi10.4psi10.8psi压力差样本流进样速度分辨率HiLoMedLowpressureHighpressure细胞周期FL301024204830724096Count300280260240220200180160140120100806040200.G0/G1CV=2.42G2/MSphaseG0/G1FL301024204830724096Count34032030028026024022020018016014012010

4、0806040200GO/G1CV=7.79.GO/G1CV=7.79流式细胞仪的构造1.细胞样本成单列依次通过光检测区2.激发并收集各种光信号液流系统光学系统光学系统激发光学系统:激发光源—激光透镜和反射镜—将激光引导到检测区域接收光学系统:滤光片等—将产生的光信号引导到对应的光学接收器激发光学系统:将激光引导到检测区域，产生光信号激光单波长高强度高稳定488nmblue633nmred405nmvioletLightSignals光学棱镜流式细胞仪检测信号InjectorTipFluorescencesignalsFocusedlaserbeam

5、SheathfluidLaserbeam1.散射光信号2.染色过细胞的荧光信号前向角散射光(FSC)侧向角散射光(SSC)360度立体角通过流式细胞仪我们可以得到---♠相对细胞大小（前向角散射光-FSC）♠相对细胞颗粒密度和内部复杂度（侧向角散射光-SSC）♠染色过细胞的相对荧光强度（荧光-Fluoresentlight）前向角散射光（FSC）Forward(AngleLight)Scatter♠FSC信号收集方向与激光束相平行♠FSC与被测细胞或颗粒相对大小及表面积相关FALSSensorLaser前向角散射光（FSC）FSCisproporti

6、onaltorelativesize&cell-surfacearea侧向角散射光（SSC）Side-scatteredlight(90DegreeLightScatter)♠SSC信号收集方向与激光束相垂直（90°）♠SSC与被测细胞或颗粒内部颗粒度和结构复杂度相关FALSSensor90LSSensorLaser侧向角散射光（SSC）SSCisproportionaltocellgranularityorinternalcomplexity.散射光（FSC&SSC）散射光能被用来区分不同细胞群体的基本形态上的差异♠通常使用“散点图”来看散射光信号

7、♠散点图上的一个点就代表一个细胞颗粒的数据eg.MajorleucocytesubpopulationscanbedifferentiatedusingFSCandSSC.Figure:CellsubpopulationsbasedonFSCvsSSCDualParameterdot-plot流式细胞仪检测信号InjectorTipFluorescencesignalsFocusedlaserbeamSheathfluidLaserbeam1.散射光信号2.染色过细胞的荧光信号自发荧光信号特异性荧光信号荧光信号（Fluoresentlight）双色荧

8、光散点图荧光强度（Fluoresenceintensity）♠荧光信号的强度代表被测细胞膜表面抗原强度或细胞