microRNA31对自发性高血压大鼠血压及左室重构的影响

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2、件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所和中国学术期刊(光盘版)电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名(手写)：触过导师签名(手写)么缮t气铆．，。／f签字日期：如协年易月易日签字日期：弘，乡年易月多日‘

3、摘要lUlIIIIIIIIIIlllIIIY2427313目的和意义：高血压病是最常见的慢性病，也是心脑血管病最主要的危险因素。心脏作为高血压病直接损伤的重要靶器官之一，最为显著的特征性病理变化是左室重构。MiRNAs是一类调控基因表达的内源性非编码的d、RNAs，研究表明这些miRNAs在调节细胞生长、分化、增殖和凋亡等方面发挥了重要作用，并参与众多疾病的病理生理过程。在众多的miRNAs中，研究表明miR．31在发生重构的心脏中表达上调，但miR．31是否能调节SHRs的血压和改善左室重构目前尚不

4、清楚。基于此，本实验通过构建miR．31抑制基因慢病毒载体，检测转染SHRs后对其血压及左室重构的影响，并从基因和蛋白水平探讨LATS2是否为miR．31调节SHRs血压及左室重构过程的靶基因及Hippo通路是否参与此过程等。旨在阐明高血压病的相关发病机制及为其治疗寻找新的靶点。方法：将16只17周龄的雄性SHRs随机分为干预组(n=6)、阴性对照组(n_5)、空白对照组(n=5)。构建miR．31抑制基因慢病毒载体及阴性对照慢病毒载体，干预组由尾静脉注射重组慢病毒，注射病毒体积为1501d，其滴度为

5、1×108TU／ml，两对照组分别注射等量的阴性对照病毒和感染增强液。通过尾袖法监测SHRs收缩压和心率变化，同时使用高频超声评价大鼠心脏结构和功能改变。3周后称重并处死SHRs，留取心脏，计算出各组左室重量指数，制作大鼠心脏石蜡切片，HE染色和Masson染色观察心脏形态、心肌细胞大小以及纤维化程度改变，并运用图像分析软件计算出心肌细胞横径和胶原容积分数。运用qRT．PCR法检测心肌组织中miR．31及Hippo通路中LATS2、MSTl／2、YAP、TAZmRNA的表达。运用免疫组化及Wester

6、nblot检测Hippo通路中LATS2蛋白的表达。结果：经DNA测序表明，miR．31抑制基因慢病毒载体构建成功，检测其滴度为8x108TU／ml。将病毒转染SHRs3周后观察各组血压及超声指标变化，阴性对照组与空白对照组比较：两组收缩压水平及各超声测量指标LVPWT、IVST、LVEDD、LVESD、EF均无明显差异，且两组自身前后比较也未见明显差异；干预组与阴性对照组比较：收缩压水平明显降低(P<0．05)，超声测量指标LVPWT、IVST、LVEDD、LVESD也存在显著差异(P<0．05)；

7、干预组自身前后比较：转染病毒后血压水平明显降低(P<0．05)，各超声测量指标LVPWT、IVST、LVEDD、LVESD差异也具有统计学意义(P<0．05)；各组间及干预组自摘要身前后比较EF均无明显改变。各组间LVMI比较：阴性对照组与空白对照组间无明显差异，干预组LVMI较阴性对照组明显减低(P

8、RT．PCR检测示干预组较两对照组心肌组织中miR．31表达下调(P<0．05)，Hippo通路基因LATS2、YAP、TAZ表达上调(P<0．05)，MSTl／2表达无明显改变。Westemblot检测显示干预组LATS2蛋白表达上调，且免疫组化染色示干预组LATS2蛋白的阳性表达明显高于阴性对照组。结论：抑制111iRNA．31表达能使SHRs血压水平下降及对心脏左室重构有明显改善作用，miR．31可能以LATS2为靶点介导Hippo通路发挥此生物学