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时间:2019-05-09
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1、课题1微生物的实验室培养专题2:微生物的培养与应用微生物包括哪五类:病毒真菌放线菌细菌原生动物特点:结构都相当简单,个体多数十分微小.通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到,有的甚至没有细胞结构.且体内一般不含有叶绿素.不能进行光合作用.原核生物界原生生物界真菌界病毒界微生物基础知识病毒的结构病毒SARS病毒、禽流感病毒2、病毒的增殖:真菌如图是酵母菌电子显微镜下的形态结构青霉放线菌1、结构:单细胞原核分支状的菌丝(基内菌丝、气生菌丝)链霉素、土霉素、四环素、氯霉素、红霉素、庆大霉素微生物中发现了几千种抗生素,其中2/3是由放线菌
2、产生的应用:细菌细菌:单细胞不分枝的原核微生物。细菌细胞微小而透明通常用适当染料染色后显微镜观察图1-1常见的三种细菌典型形态A.球菌B.杆菌C.弧菌外形与大小菌落:单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时,就会形成一个肉眼可见的,具有一定形态结构的子细胞群体,叫做菌落。菌落是鉴定菌种的重要依据。一、培养基培养基(培养液)是由人工方法配制而成的,专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。1.定义标配不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方不管哪种培养基一般都含有水、碳源、和氮源、无机盐、等营养物质,另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养
3、物质,例如:生长因子(即细菌生长必需,而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。(1)按物理状态分:固体培养基液体培养基半固体培养基(2)按功能分:选择培养基鉴别培养基(3)按成分分:天然培养基合成培养基2.培养基的类型菌种分离、鉴定菌落等。N固体培养基:菌落,菌苔用途:纯化(分离)鉴定、活菌计数、保藏菌种液体培养基:表面生长均匀混浊生长沉淀生长用途:增菌、工业生产半固体培养基:用途:动力检测选择培养基加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基:分离金黄色
4、葡萄球菌不加氮源的无氮培养基:分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基:分离自养型微生物根据细胞生存所需物质的种类和数量,用人工方法模拟合成的。优点:标准化生产,组分和含量相对固定;成本低缺点:缺少某些成分,不能完全满足体外细胞生长需要。合成培养基:天然培养基有血清、血浆、和组织提取液(如鸡胚和牛胚浸液)。优点:营养成分丰富,培养效果好缺点:来源受限;成分复杂,影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析;易发生支原体污染;天然培养基:人工合成培养基只能维持细胞生存,要想使细胞生长和繁殖,还需补充一定量的天然培养基(如血清)。(二)无菌技
5、术1.无菌技术的概念无菌操作泛指在培养微生物的操作中,所有防止杂菌污染的方法。其操作中的每一步都需要做到“无菌”,即防止杂菌污染。只有熟练、规范地进行无菌操作,才可能成功地培养微生物。是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。使用较为温和的化学或物理方法,杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)灭菌使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物,包括芽孢和孢子,而达到完全无菌之过程。消毒1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法:70-75℃下煮30min或80℃下煮15min3、化学药剂消毒法:氯气消毒水源、酒
6、精擦手用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;4、紫外线消毒……(1)消毒的方法:3.常用的消毒与灭菌的方法牛奶1、灼烧灭菌(金属器具)2、干热灭菌:160-170℃下加热1-2h。3、高压蒸气灭菌:100kPa、121℃下维持15-30min.(2)灭菌的方法:1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外,还有什么目的?2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要,请选择合适的方法。(1)培养细菌用的培养基与培养皿(2)玻棒、试管、烧瓶和吸管(3)实验操作者的双手答:无菌技术还能有效避免操作者自身被微
7、生物感染。答:(1)、(2)需要灭菌;(3)需要消毒。旁栏思考4.微生物实验室培养的基本操作程序配制培养基包器具器具、培养基灭菌菌种扩增倒平板微生物接种(纯化)恒温箱培养观察记录实验流程菌种保存(1)制备培养基若配置100ml的培养基则怎样称取?配制培养基LB固体培养基1.计算、称量2.溶化3.调pH:pH7.64.过滤:(这一步可以省去)5.分装:分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上,以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。6.加塞7.包扎4.微生物实验室培养的基本操作程序配制培
8、养基包器具器具、培养基灭菌菌种扩增倒平板微生物接种(纯化)恒温箱培养观察记录实验流程菌种保存包器材4.微生物实验室培养的基本操作程序配制培养基包器具器具、培养基灭菌菌种扩增倒平板微生物接种(纯化)恒温箱培养观察记录实验流程菌种保存条件:121℃、1
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