脑红蛋白在低氧预适应鼠脑中的表达及其耐低氧研究

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1、首都医科大学博士学位论文英文缩略语表Acr(acrlyamide)丙烯酞胺APS(ammoniumpersulfate)过硫酸氨ATP(adenosinetriphosphate)三磷酸腺昔BCA(bicinchoninicacid)双金鸡宁酸Bis(N,N’-Methylene-bis-Acrylamide)N,N’一亚甲双丙烯酸胺bp(basepair)碱基对DAB(Diaminobenidine)二氨基联苯胺DOPAC(3,4-dihydroxyphenylaceticacid)3,4一二轻苯丙酸DTT(dithiothreitol)二硫苏糖醇E

2、B(ethidiumbromide)澳化乙锭EDTA(ethylenediaminetetraaceticacid)乙二氨四乙酸EGTA[ethyleneglycol-bis-(-aminoethylether)-N,N,N'N’-tetraaceticacid〕乙二醇双(2-氨基乙醚)四乙酸HSP(heatstrokeprotein)热休克蛋白Kb(kilobasepair)千碱基对KF(potassiumfluoride)氟化钾LBmedia(Luria-bertanimedia)LB培养基MCS(multiplecolonsites)多克隆位点N

3、gb(neuroglobin)脑红蛋白NMDA(N-methyl-d-aspartate)N一甲基一D一门冬氨酸NO(nitricoxide)一氧化氮OD(opticaldensity)光密度PAGE(polyacrylamidegelelectrophoresis)聚丙烯酞胺凝胶电泳PB(phoaphatebuffer)磷酸缓冲液首都医科大学博士学位论文PBS(phosphate-buffersaline)磷酸缓冲盐溶液钠SDS(sodiumdodecylsulfate)十二烷基硫酸钠TEMED(N,N,N'，N’-Tetramethylethyle

4、nediamine)N,N,N'，N'-四甲基乙二胺Tris[Tri(hydroxymethyl)aminomethane]三(轻甲基)氨基甲烷首都医科大学博士学位论文脑红蛋白在低氧预适应鼠脑中的表达及其耐低氧研究低氧/缺血造成的脑组织损伤是最常见的病理生理现象之一，近年来人们逐渐认识到脑组织中具有一种耐受缺氧/缺血性损伤的内源性保护机制，即低氧/缺血预适应。在与氧密切相关的运输和贮存这一生理过程中，人们认识到血红蛋白和肌红蛋白的功能。我们知道，脑组织的足够量氧供对脑组织的功能是非常重要的，尽管脑仅占体重的2%，但在安静状态下其氧耗约占机体总氧耗的20

5、%，是否在脑组织中也存在一种类似肌红蛋白的物质以利于脑组织对氧的摄取和贮存呢?德国白Burmester等人(q在人和小鼠中发现了一种属于珠蛋白家族但与血红蛋和肌红蛋白不同的一种蛋白质，命名为脑红蛋白Neuroglobin。一年后，SunYunjuan等人【z，在研究Ngb与缺氧损伤关系中发现:脑红蛋白在缺氧性损伤中作为一个缺氧诱导的神经保护因子发挥着作用。但是Ngb在低氧预适应机制中是否具有一定的作用，尚未见报道。本实验首先对缺氧0次(Ho，正常对照组)、缺氧I次(H,，低氧对照组)、缺氧4次(H,，低氧预适应组)的小鼠脑组织在mRNA水平进行了Ngb

6、的原位杂交研究和在蛋白质水平进行了Westernblotting研究。随后又进行了Ngb克隆至真核表达载体pEGFP-N1并转化神经母细胞瘤细胞，在低氧环境中观察了其耐受情况，从而初步探讨了Ngb在缺氧预适应中的作用。本论文包括以下实验:I,Ngb在预适应小鼠脑组织中的Westernblotting研究对Ho.H=H;三组小鼠脑组织进行蛋白质提取，用Ngb的抗体行Westernblotting，随着缺氧次数的增加，Ngb的蛋白质水平呈逐渐增高的趋势，Ngb可能与小鼠对缺氧的耐受性提高有关。2,Ngb在预适应小鼠脑皮层中的原位杂交研究Ho、H,.H，三组

7、小鼠脑组织进行冰冻切片，用Ngb的RNA探针行_首都医科大学博士学位论文原位杂交，随着缺氧次数的增加，Ngb的mRNA水平呈逐渐增高的趋势，Ngb可能与小鼠对缺氧的耐受性提高有关。3,pEGFP-N1-Ngb转化的神经母细胞瘤细胞对低氧耐受的研究将Ngb的cDNA克隆至真核表达载体pEGFP-N1中，然后转化神经母细胞瘤细胞，在低氧环境下进行观察:Ngb表达的神经母细胞瘤细胞提高了其于低氧环境下的耐受性。根据以上结果，本论文提出以下论点:1.在体实验表明，预适应形成机制中，Ngb可能与小鼠对缺氧的耐受J睦提高有关。2.在离体实验中，Ngb提高离体细胞对

8、缺氧的耐受性。我们认为:在小鼠脑低氧预适应形成机制中，对低氧环境中作为增加氧的摄取，即“开源”