瓶霉属Phialophora和外瓶霉属Exophiala菌株重金属耐性筛选及分类学研究

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1、LaboratoryofConservationandUtilizationofBio—resourcesYunnanUniversity,Kunming，650091P．R．ChinaDissertationToobtaintheacademicdegreeofmasterofMicrobiologicalSciencesPresentedbyLuWangAdvisedbyProf．Dr．ZhaoZhiwei&A．RTaoLiMay，2013独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，

2、论文中不包含其他人或集体已经发表或撰写过的研究成果，对本文的研究做出贡献的集体和个人均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：互至遂日期：丛!；：!：；论文使用和授权说明本人完全了解云南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文和论文电子版；允许论文被查阅或借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。(保密的论文在解密后应遵循此规定)研究生签名：三赵导师签名：日期：Ⅲ·；本人及导师同意将学位论文提交至清华大学“中国学术期刊(光盘版)电子杂志社”进行电子和网络出版，并编入C

3、NKI系列数据库，传播本学位论文的全部或部分内容，同意按《中国优秀博硕士学位论文全文数据库出版章程》规定享受相关权益。，、／，研究生签名．．蔓≥麓!：导师签名：乏≥ll’，’’f日飙掣羔二羔i摘要云南的重金属矿产开采范围广、历史悠久，长期大面积的采矿、冶矿己造成严重的土壤重金属污染，长久地影响着当地的农业和经济的发展，因此修复重金属污染的土壤，是一项长期而又艰巨的任务。本研究组在开展云南矿区植物深色有隔内生真菌(Darkseptateendophyte，DSE)的相关研究中发现瓶霉属(Phialophora)和外瓶霉属(Exophiala)真菌是矿区特殊生境中

4、的优势类群，它们在矿区植物根部具有较高的定殖率。本论文首先通过分子鉴定的方法确定了来自矿区和非矿区的91株瓶霉属和外瓶霉属菌株，依次开展了菌株的重金属抗性筛选实验，筛选到了一批高抗和敏感菌株；对两属菌株的ITS区序列基因进行了测序，构建了分子进化系统树；对两属中的产孢菌株进行分类鉴定，确定了部分菌株的分类地位，得出以下结果和结论：(1)通过最小抑制浓度(MinimalInhibitionConcentration，MIC)筛选技术对来自矿区和非矿区瓶霉和外瓶霉菌株进行了重金属抗性筛选，得到了部分重金属高抗菌株和敏感菌株，包括敏感菌株2株，高抗菌株33株，33株

5、高抗菌均分离自重金属矿区(澜沧县募乃和会泽县渚海)。比较不同样地菌株之间，及同一样地不同菌株之问的MIC值，发现矿区菌株的MIC值一般高于非矿区，而同一矿区菌株之间的MIC值存在着很大的差异。(2)对菌株ITS序列进行了分子测序，并构建分子系统进化树，根据两属在各样地的分布情况，并结合重金属筛选试验结果进行分析发现，分离自西双版纳(非矿区)、募乃、兰坪矿区的菌株人多属于Phialophora，而分离白会泽的菌株则以Exophiala居多。此外环境及宿主植物对DSE菌株具有一定的“偏好性”。(3)对7株产孢菌株进行了形态学分类，同时辅以分子鉴定，确立了其中4个菌

6、株的分类学地位，它们分别是：Phialophoramelinii、Phialophoraluteo—olivacea、Exophialasalmonis和Exophialapisciphiala，另有两株菌属于Exophiala，可能是新的分类单元。关键词：深色有隔内生菌；瓶霉属；外瓶霉属；分类学；系统学；重金属抗性AbstractYunnanhasalonghistoryandawiderangeofmining．Long—termminingandsmeltinginlargeareashavecausedserioussoilheavymetalpoll

7、utioninlocal，andthenimpactedonthelocalagriculturalandeconomicdevelopment．Thus，eliminatingheavymetalsfromcontaminatedsoilisalongandarduoustaskforYunnan．Ourresearchgrouphascarriedoutdarkseptateendophyte(DSE)researchformanyyears，andalotofDSEstrainswereisolated．AmongtheobtainedDSE，Phial

8、ophoraandExophialaa