资源描述：
《脂肪酸合成酶抑制剂抑制小细胞肺癌细胞株NCIH446增殖并诱导其凋亡的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、吉林大学硕士学位论文摘要肺癌是目前全世界第一位的肿瘤致死原因，其中近20%为小细胞肺癌(SCLC)亚型。目前由于药物的副反应和耐药性问题，SCLC治疗效果一直不理想。寻找高效和低毒的肿瘤抑制剂一直是科研工作者所努力的方向。脂肪酸合成酶是参与将饮食中碳水化合物转化为脂肪酸的重要酶类。多种恶性肿瘤如乳腺癌、前列腺癌、大肠癌、卵巢癌、子宫内膜癌等，脂肪酸合成与FAS表达均增加，其水平比正常组织要高4-20倍。在可获得充足的饮食脂肪酸的情况下，大部分正常组织脂肪酸合成下调，但肿瘤组织内源性脂肪酸合成依旧活跃。有研究表明，FAS表达水平与患者预后呈负相关，瘤组织
2、FAS表达高的患者，其侵袭性强，发生早期转移的几率大，生存期短，故FAS可以作为恶性肿瘤的诊断和预后判定的指标。有研究发现，在快速增殖的肿瘤组织中，FAS与Ki-67-一一种增殖抗原，二者平行表达。而且FAS在人类肿瘤中广泛高表达，且与肿瘤侵袭性特征密切相关，说明脂肪酸合成有利于肿瘤细胞的生长与增殖。Pizer等人报道了FAS抑制剂—浅蓝菌素(cerulenin)通过抑制乳腺癌细胞内源性脂肪酸合成而使肿瘤细胞凋亡，阻遏肿瘤细胞增殖，且不抑制正常人成纤维细胞的增殖，认为癌细胞内的FAS可能是一个潜在的选择性抗肿瘤靶位。脂肪酸合成酶抑制剂包括两种:天然产物
3、浅蓝菌素和人工合成的C75o60年代发现浅蓝菌素是一种广谱脂肪酸合成酶抑制剂，它是蓝色头抱霉的自然代谢产物，化学名为(2R,3S)吉林大学硕士学位论文-2,3一环氧一4酮-7,10一反，反12碳二烯酸酞胺。浅蓝菌素特异性的以环氧部位与脂肪酸合成酶中的p一酮酞基合成酶的活性部位半肤氨酸疏基形成共价结合，抑制脂肪酸合成酶的活性。体外培养的人肿瘤细胞加入浅蓝菌素后，脂肪酸合成迅速减少，随后DNA复制受抑，S期阻滞，最终发生凋亡。浅蓝菌素对一大部分己建立的人肿瘤细胞株有广泛而明显的抗癌活性。脂肪酸合成酶抑制剂的抗癌作用在体内实验中也得到了证实。脂肪酸合成酶抑制
4、剂诱导肿瘤细胞凋亡的机制还不完全清楚。有学者认为内源性脂肪酸的合成提供了肿瘤细胞生长和增殖所必需的重要结构脂类，故认为脂肪酸合成减少的脂肪酸饥饿机制是脂肪酸合成酶抑制剂细胞毒作用的机制。还有人认为丙二酞CoA升高是FAS抑制剂的特征性反应，在引起肿瘤细胞细胞毒效应中起重要作用。浅蓝菌素在体外对许多肿瘤细胞株有生长抑制作用，但其对小细胞肺癌细胞株的作用尚未见报道，本实验将研究浅蓝菌素对NCI-H446小细胞肺癌细胞株的生长抑制及诱导凋亡的作用。关于浅蓝菌素对FAS表达的影响，在国内外的报道都很少，本文通过免疫组化方法半定量研究浅蓝菌素与FAS的表达水平是
5、否相关。本实验分为实验组和对照组，实验组分别给予浓度分别为0.08,0.4,2,10,20ug/ml的浅蓝菌素，对照组加入等量的含有0.2%DMSO的PBS。用MTT法测定不同浓度的浅蓝菌素对NCI-H446小细胞肺癌细胞的抑制作用。通过倒置显微镜、普通光学显微镜、和丫睫橙荧光染色观察浅蓝菌素引起细胞凋亡的形态学改变。然后利用流式细胞仪检测细胞DNA周期的改变。为了明确脂肪酸合成酶抑制剂对肿瘤细胞内FAS的表达是否有吉林大学硕士学位论文影响，本实验用免疫组化方法半定量检测了浅蓝菌素对FAS表达的作用。实验结果如下:1,MTT结果0.4,2,10,20u
6、g/ml浓度下，浅蓝菌素对细胞的抑制率与DMSO对照组相比，有显著性差异(P0.05).2、形态学改变(1)、倒置显微镜观察可见经浅蓝菌素处理后，细胞贴壁不紧密，悬浮细胞增多。细胞膜完整‘可有突起，细胞体积变.J"。(2)、普通光学显微镜观察可见凋亡细胞皱缩，胞摸完整，染色质凝聚，嗜碱性增强，染成深蓝色，成环状或新月状附在核膜周边，或细胞核固缩碎裂成数个圆形颗粒，核膜消失。(3)荧光显微镜观察可见凋亡细胞的胞核内可见致密浓染的黄绿色荧光，甚至可见黄绿色碎片。不同浓度浅蓝菌素处理组细
7、胞的凋亡率与对照组相比均有显著性差异。3、浅蓝菌素处理NCI-H446细胞12小时后，经流式细胞仪进行细胞周期检查发现S期百分比降低，G2-M期百分比增高，并在10,20ug/L浓度组出现了亚二倍体峰(sub-G,)4、免疫组化染色后，FAS表达阳性的标准是胞浆内可见染成棕黄色的颗粒。按照染色强度分为一、+、+、+十四个等级。镜下统计对照组及浅蓝菌素处理组的阳性细胞数，并计算阳性率。对照组阳性率为94%，浅蓝菌素0.08,0.4,2,10,20ug/L组阳性率分别为90.5%,87.5%,74%,62.5%,55%，经统计学分析发现各组同对照组相比均有
8、统计学差异(P<0.05).本实验最终得出如下结论:1、浅蓝菌素对NC工一H446细胞的增殖有
