新城疫病毒NDVCN株对几种人肿瘤细胞的杀伤作用及其机理的分析

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1、武汉生物制品研究所硕士学位论文新城疫病毒（NDV）CN株对几种人肿瘤细胞的杀伤作用及其机理的分析姓名：徐葛林申请学位级别：硕士专业：免疫学指导教师：全家妩2003.7.1武汉生物制品研究所2003年博士学位论文中文摘要新城疫病毒(NDV)CN株对几种人肿瘤细胞的杀伤作用及其机理的分析中文摘要本课题以我国NDV病毒CN毒株为研究对象，体外检测NDV--CN对人肝癌细胞、喉癌细胞、肺腺癌细胞、宫颈癌细胞、膀胱癌细胞、神经胶质瘤细胞株、人二倍体细胞及小鼠脾淋巴细胞的杀伤效果，结果表明NDV．-CN病毒可不同程

2、度地杀伤人肿瘤细胞，感染剂量与杀伤性之间存在一定的量效关系，而该病毒对正常的人二倍体细胞杀伤性很弱，对小鼠脾淋巴细胞几无影响。NDV-CN病毒经37。C孵放9天、4。C放置1l天、反复冻融8次以及紫外线照射30分钟均不影响其杀肿瘤细胞活性及其血凝滴度，表明该病毒对外环境有一定的耐受性，实验证明在抗体存在并过量的条件下，该病毒仍保持其杀肿瘤细胞的活性，提示今后临床应用中，该病毒的杀肿瘤活性可不受患者体内产生病毒抗体的影响。用RT-PCR、免疫荧光、电镜等方法检测发现NDV-CN病毒感染肿瘤细胞后，可迅速在

3、胞浆中复制病毒核酸，在感染细胞膜上表达病毒蛋白，并在胞浆中组装新的病毒子代颗粒，细胞培养发现新生的子代病毒仍具有杀肿瘤细胞活性，表明NDV-CN病毒感染肿瘤细胞后在胞浆中大量复制，导致细胞死亡，同时新生的子代病毒又可感染邻近的肿瘤细胞造成叛一轮的死亡。最终导致所有的肿瘤细胞死亡。通过细胞DNA电泳、电镜观察、Caspase3活性检测发现NDV-CN病毒可导致感染细胞发生凋亡及坏死。其中人肝癌细胞HEP3B和喉癌细胞Hep2表现出明显的凋亡特征；而人肺腺癌细胞A549、宫颈癌细胞Hela和膀胱癌细胞T24

4、则表现为以坏死为主的特征。关键词：新城疫病毒肿瘤细胞杀肿瘤细胞活性凋亡坏死武汉生物制品研究所2003年博士学位论文AbstractAnalysistheMechanismandtheOncolyticeffectsof』VjwcastleDiseaseHr‘西toSomeStrainsofThmorCellsAbstractTheobjectofthisthemeisCNstrainofNDVThecytolysisofNDV—CNwastestedtodifferentcellsincludinghu

5、manheparcarcinoma，larynxcarcinoma，lungcarcinoma，cervialcarcinoma，bladdercarcinoma,gliomacells，humandiploidcellsandnormalmousespleenlymphocytesinvitro．nleresultshowedthatallthehumantumorcellswerekilledbyNDV-CNvirus．Therewasacorrelationbetweenthedosesofino

6、culatingvirusandthecytolysiseffect．Humandiploidcellsmaintained79％survivalrateafterinfectedwi也NDV-CNvirus．ButNDV-CNhadnoeffecttomousespleenlymphocytes．nleresultsshowedthattheoncolysisandthehemagglutinatingdosesofNDV-CNviruswerenotaffectedaftertheviruswasi

7、noculated37。Cfor9days．4。Cfor4days．repeatingfreeze-thawcyclesfor8timesorUVirradiationfor30minutes．ItsuggestedthatNDV-CNvirusisresistanttocircumstances．TheresultsshowedtheoncolysisofNDV—CNwasmaintalnedwhentherewasexcessiveantibodyagainstNDV-CN．Itsuggestedt

8、hattheoncolysisofthevireswouldnotaffectedbytheantibodyagainstthevirusinvivo．TheresultofRT-PCRshowedNDV-CNviresgenomewasreplicatedintheinfectedcellplasma．AndNDV-CNvirusproteinswereexpressedinthemembranceofinfectedcellsdetec