氯化镧对RANKL诱导的RAW2647向破骨细胞分化作用及其相关基因表达的实验研究

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3、llJllllJllllllllJlllJllllJllJl．1lllJl．1lIY2427581目的：观察氯化镧(1anthanumchloride)对RANKL(ReceptoractivatorofNF．r．Bligand)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264．7向破骨细胞分化的作用。观察破骨细胞基因(c．fos、trap、cathepsinK、MMP．9)及NF．r．B通路基因(traf6、c．src、RANK、Fral)mRNA的表达，抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察破骨细胞生成数量，噻唑蓝(

4、MTT)观察破骨细胞活性，流式细胞术检测破骨细胞凋亡情况。初步分析稀土镧元素与RANKL诱导的破骨细胞之间相互关系。方法：实验细胞株采用小鼠巨噬细胞系RAW264．7，购自中国科学院细胞库(ATCC：TIB．71)。氯化镧(LaCl3·7H20，纯度99．9％)购于美国Simga公司。重组鼠核因子KB受体活化素的配体(ReceptorActivatorofNuclearFactor-rJ3ligand，凡ⅢKL)购自美国R&D公司。按照实验设计以添加氯化镧浓度不同分为五组：①空白组(RAW264．7)②

5、对照组(RAW264．7+50ng／mlRANKL)③实验组低浓度镧(RAW264．7+50ng／mlRANKL+2．5I，tmol／LLaCl3)④实验组中浓度镧(RAW264．7+50ng／mlRANKL+20I．tmol／LLaCl3)⑤实验组高浓度镧(RAW264．7+50ng／mlRANKL+1009mol／LLaCl3)。采用MTT、流式细胞术观察镧对RANKL诱导的RAW264．7活性，RT-PCR检测破骨细胞基因表达，TRAP染色分析破骨细胞生成数量。结果：MTT检测24、48及72小时

6、，不同浓度镧对RANKL诱导的RAW264．7无明显毒性作用，OD值差异无统计学意义(胗O．05)。TRAP染色检测不同浓度镧对RANKL诱导RAW264．7生成破骨细胞数量。空白组无成熟破骨细胞；实验组(137．60+4．54)／cm2、(102．70-士3．23)／cm2、(72．20+5．28)／cm2相较于对照组(163．00士5．82)／cm2，破骨细胞数量减少(P<0．05)；实验组各浓度组之间，破骨细胞数量无明显差异(胗O．05)。流式细胞术检测镧对破骨细胞凋亡作用，各组别之间差异无统计学

7、意义(P>0．05)。摘要RT-PCR检测破骨细胞基因及通路基因c．fos、trap、RANK、traf6、c—src、Fral、cathepsinK及MMP．9的表达。对照组较实验组表达增多，差异明显(尸O．05)。结论：不同浓度(2．5、20、100}tmol／L)氯化镧对RANKL诱导的RAW264．7分化、增殖、凋亡无明显毒性作用。不同浓度(2．5、20、100I-tmol／L)氯化镧减少RANKL诱导的RAW264．7向成熟破骨细胞分化。但

8、各浓度组之间抑制作用无明显差异。RANKL可单独诱导小鼠巨噬细胞RAW264．7向破骨细胞分化成熟。关键词：氯化镧；RAW264．7；破骨细胞；RANKL；NF．r,BAbstractABSTRACTobjective：ToobservetheroleoflanthanumchlorideonRANKL(ReceptoractivatorofNF·KBligand)whichinducemurinemacrophageRAW264．7dif