表皮生长因子对体外长期孵育保存的人胎胰岛的支持作用

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1、表皮生长因子对体外长期孵育保存的人胎胰岛的支持作用【关键词】尿抑胃素　　【Abstract】AIM:Toinvestigatetheeffectsofepidermalgrowthfactor(EGF)ontheproliferationandsecretionofhumanembryonicpancreaticisletsinvitro.METHODS:IsletswereisolatedfrompancreasesoftwelvehumanembryosandculturedinRPMI1640mediumcontainin

2、gEGF(studygroup)orwithoutEGF(controlgroup).Thepercentageofisletbetacellswasdetected.Theinsulincontentinthemedia,isletcellsandisletbetacellsinsulinreleaseweremeasured.RESULTS:Bytheendofculture,thepercentageofisletbetacellswassignificantlyhigherinstudygroupcomparedwith

3、thatincontrolgroup.Theinsulincontentofmediaandisletcellsreleasewassignificantlyhigherinstudygroupcomparedwiththatincontrolgroup.CONCLUSION:ResultsindicatedthattheadditionofEGFtothemediaprolongsthesurvivaltimeofisletcellsandpromotetheproliferationandsecretionofisletce

4、lls.　　【Keywords】isletsoflangerhans;preservation,biological;epidermalgrowthfactorurogastrone　　【摘要】目的：7研究表皮生长因子（EGF）对促进人胎胰岛增殖与分泌功能.方法:12个人胎胰岛分别在含有EGF（实验组）和不含有EGF（对照组）的培养基中孵育，观察胰岛B细胞的分布，测定培养基中和细胞内胰岛素浓度和胰岛素释放量.结果:培养结束后实验组胰岛B细胞明显高于对照组；培养基和胰岛B细胞中胰岛素释放量实验组高于对照组.结论:培养液中加入EGF

5、能延长胰岛细胞存活期、促进胰岛细胞增殖和分泌功能.　　【关键词】胰岛；保存，生物学；表皮生长因子尿抑胃素　　0引言　　为了有足够数量的健康胰岛供给临床移植使用，国内外都在积极研究长期保存胰岛的方法［1,2］.经典的深低温保存方法，需要较贵重的设备，操作繁杂，复苏后胰岛的失活率＞30%；孵育保存的方法胰岛难以长期存活，但只能维持1mo，最多达5mo［3］，胰岛细胞的调亡在所难免.我们研究了表皮生长因子（epidermalgrowthfactor）具有促进人胎胰岛的增殖分泌作用.通过观察胰岛细胞的形态，测定细胞内胰岛素和胰岛释放量，

6、以及胰岛组织的存活期，探讨更有意义的保存胰岛的方法.　　1材料和方法　　1.1材料EGF购自美国Sigma公司，RPMI1640培养液、人血清购自北京帮定医药公司.百级净化实验室内，所有操作在洁净工作台进行.　　1.2方法　　1.2.1人胎胰岛的获取平均胎龄21周的人胎胰12例.经4℃7无菌Hanks液漂洗，去除胰腺包膜、血管、胰管，剪为1mm大小的碎块，再次漂洗后置于培养瓶内.　　1.2.2孵育条件RPMI1640培养液中加入80mL・L-1同型人血清、丁胺卡那霉素100u・mL-1；培养箱中37℃

7、,50mL・L-1CO2培养；隔日更换1/3培养液，共孵育14d.　　1.2.3分组12个人胎胰岛随机分为实验组和对照组.实验组：表皮生长因子（EGF），100ng・mL-1约1mL加入上述孵育胰岛14d的培养瓶内，共6瓶.每次更换培养液时均按此浓度加入EGF.对照组:未加EGF培养瓶做为对照组,共6瓶.更换培养液时也不加EGF.　　1.2.4观察指标免疫组织化学的病理学观察：不同孵育时限分别收集胰岛细胞，100mL・L-1甲醛固定，石醋切片，HE染色及胰岛素和高糖素抗体酶标染色，观察细

8、胞有丝分裂相及胰岛B细胞分布情况.　　不同孵育时限时胰岛功能指标的观察：培养液中胰岛素分泌量；胰岛素释放试验（低糖和高糖加茶碱刺激）.　　统计学处理：实验数据用x±s表示，采用方差分析进行组间均数比较.　　2结果　　2.1酶标组织化学染色的组织学结果光学显微镜下