腺病毒载体RNA干扰抑制FasCD95表达作用

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1、腺病毒载体RNA干扰抑制Fas（CD95）表达作用作者：贾建桃　王秦秦　马丽菊【摘要】目的:研究血管内皮生长因子（vascularendothelialgrowthfactor，VEGF）的表达与肺癌临床病理特征的关系，探讨VEGF潜在临床应用价值。方法:采用免疫组织化学法，检测手术切除的68例肺癌组织和50例对照组织标本中VEGF的表达。结果:VEGF在肺癌中的表达率高于对照组。VEGF主要表达于细胞质和细胞膜，与肺癌的TNM分期和淋巴结转移有关，与其它各项临床病理特征无明显统计学相关性。结论:VEGF与肺癌疾病

2、进展、转移和患者的预后有关，可作为评估肺癌病程、转移力和判断预后的一个重要标志物。【关键词】肺癌;血管内皮生长因子;免疫组织化学　肺癌生长和转移是一个复杂的多步骤过程，受到多种因素的影响和组织中多种生长因子的调节，其中新生血管与肿瘤无限增殖密切相关。VEGF是迄今为止诱导肿瘤血管形成作用最强、特异性最高的血管生长因子［1］，它参与了肿瘤的增殖、转移和血管的再生。本研究主要应用免疫组化技术检测VEGF在肺癌组织和对照组中的表达，并探讨其在肺癌诊断治疗中的临床意义。6　　1资料与方法　　1.1标本来源收集昆明医学院第一

3、、第三附属医院病理科2003年～2006年手术切除的肺癌石蜡包埋标本68例，其中男性45例，女性23例，年龄30岁～82岁，中位年龄56岁。所有病例术前均未进行放、化疗。按照国际抗癌组织协会（UICC）所提出的TNM分期法，对全部资料进行统一分类:腺癌24例，鳞癌33例，小细胞癌6例，大细胞癌5例。高分化17例，中分化28例，低分化18例，未分化5例。有淋巴结转移的24例，无淋巴结转移的44例。Ⅰ期40例，Ⅱ期14例，Ⅲ期9例，Ⅳ期5例。对照组取远癌肺组织和同期肺良性疾病旁肺组织标本共50例。　　1.2方法石蜡标本

4、切片成5μm厚，置55℃～60℃烤2h，常规脱蜡后采用辣根过氧化酶标记链霉卵白素（SP）免疫组织化学方法，DAB显色，苏木精复染，封片。鼠抗人VEGF单克隆抗体为北京中山生物技术公司产品，工作浓度1∶50;SP试剂盒为美国ZYMED公司产品，染色步骤按产品说明书进行。用已知阳性切片作为阳性对照，用PBS代替一抗作为空白对照。　　1.3结果判定光学显微镜下观察，以胞质或胞膜呈棕黄色者为阳性细胞，参考VolmMetal的评判标准［2］6，以随意5个400倍视野的癌巢区阳性细胞所占比例的平均数分，阳性细胞数<10%

5、为阴性，阳性细胞数>10%为阳性。　　1.4统计学处理应用SPSS11.0统计分析软件，显著性用χ2检验，P<0.05时有统计学意义。　　2结果　　2.1VEGF在肺癌及对照组中的表达VEGF蛋白主要表达于胞质和胞膜。VEGF的阳性表达率在肺癌组和对照组间有显著性差异（见表1）。　　表1VEGF在肺癌及对照组中的表达比较（略）　　2.2VEGF表达与肺癌临床病理特征间的关系VEGF的阳性表达与患者性别、年龄、肺癌组织学分型和分化程度之间无显著性差异（P>0.05），而与有无淋巴结转移和TNM分期有

6、相关性（P<0.05）（见表2）。　　表2VEGF表达与肺癌临床病理特征间的关系（略）　　3讨论6　　VEGF是目前所知道的最强的血管内皮细胞的生长因子，对肿瘤新生血管内皮细胞增殖、迁移和血管构建调控的作用强且特异性高，被认为在肿瘤的新生血管生成中起关键作用。1988年Srivas-tava［3］等在对皮肤黑色素瘤的研究中首次发现了新的血管形成与肿瘤进展、转移的有关。此后大量研究表明肿瘤的生长和转移依赖于新的血管形成。因而VEGF对包括肺癌在内的肿瘤的生长、转移和复发起关键作用。　　本研究中肺癌组VEGF的表

7、达明显增高，与对照组比较有显著性差异，与患者的年龄、性别、肺癌的组织学分型和分化程度无明显相关性，这与李斌、吴萍等［4，5］的研究结果一致。　　本研究结果同时表明VEGF的表达随肺癌TNM分期进展而增高，提示VEGF可作为评价肺癌患者病情进展的一个参考指标。Han等［6］的研究表显示:VEGF阳性表达与生存期呈显著负相关，表明VEGF的表达可作为判断预后的危险因素之一。　　本实验研究结果还显示:有淋巴结转移的肺癌组VEGF阳性率明显高于无淋巴结转移组，这与车国卫等［7］的研究结果一致。Li等［8］6应用反义VEGF

8、基因阻断VEGF基因的表达，明显抑制肿瘤的生长、血管生成、肺转移和远处器官转移，从而证实了VEGF与肺癌生长和淋巴结的转移密切相关。可能的机制是VEGF促进肿瘤中微血管的形成，同时诱导血管通透性增加，导致肿瘤细胞的生物学行为进一步恶化并更容易侵入血管，进而进入淋巴管。因此，VEGF促进肿瘤血管生成的同时也增加了肿瘤细胞淋巴结转移的几率。虽然VEGF能特异性地