石斑鱼虹彩病毒SGIVORF112编码类胶原结构蛋白的分子特征

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1、蛋白和病毒囊膜蛋白的质谱鉴定的基础上，我们又利用免疫胶体金标记技术和WesternBlot印记确定了该蛋白为病毒的非囊膜结构蛋白；WesternBlot结果表明该蛋白在病毒复制过程中大量表达，其分子量位置也远高于通过蛋白质序列本身算得的分子量，说明天然的CLPll2携带有蛋白的修饰基团。紧接着，我们检测了CLPll2的亚细胞定位和在病毒复制中的作用。GFP融合蛋白转染和免疫荧光实验的结果一致表明CLPll2在宿主细胞中呈胞质分布，且在病毒感染后围绕细胞核和病毒包涵体呈现不均匀的点块状分布；进一步的Morph

2、olinoOligo干扰实验结果揭示ORFll2基因的沉默表达可以延迟病毒的复制进度。最后的SGIV感染GS的超薄切片结果也显示出经过Morpholinooligos干扰的GS细胞中，病毒的组装相对正常细胞感染的病毒颗粒来说，结构不完整。说明，CLPl12在病毒的组装复制中起到帮助的作用。根据以上这些结果，我们推测ORFll2编码的蛋白质CLPl12在SGIV侵染宿主细胞之后的复制组装过程中起到一定的帮助作用，其功能值得进一步深入研究。关键词：SGIV类胶原结构蛋白(CLP)分子特征病毒复制RNA干扰IIp

3、roteomicanalysis．WesternblotanalysisshowedthatCLP12WaShighlyexpressedandmolecularweightishigherthanthatofpredictionduringthevirusreplication，suggestingthatCLP12hasbeenmodified．ImmunofluorescencesubcellularlocalizationexperimentsshowedthatCLP12locatedincyto

4、plasmaroundnucleusandvirusinclusionbody．WhentheCLP12genewasknockeddownbyRNAinterferencewithMorpholinoOligo，thevirusreproductionWaSobviouslyreducedindicatingthatCLP12wasinvolvedinSGIVreplication．Finally,wefoundsomevironswerenotintegratedpackagedwhenweaddedM

5、opholinooligosbeforevirusinfection．FromtheresultsofthemolecularcharacterizationofCLP12，wesuggestthatCLPl2maybehelpfultovirons’assemblingandreplication．Keywords：SGIV；Collagen—likeProtein(CLP)；MolecularCharacterization；Virusreplication；RNAinterferenceIV论文原创性

6、声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：叶李莉日期：肋加．‘．上学位论文使用授权声明本人完全了解中山大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版，有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允

7、许论文进入学校图书馆、院系资料室被查阅，有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其他方法保存学位论文。保密论文保密期满后，适用本声明。学位论文作者签名：叶鸯莉日期：上p／D．‘．上导师签名：日期：加中山大学硕士学位论文第一章前言病毒(virus)是一类由核酸分子(DNA或RNA)和蛋白质构成的非细胞形态的营寄生生活的生命体。1898年，荷兰细菌学家Beijerinck在研究烟草花叶病致病因子时首次提出了病毒的概念，才终于让这种与细菌完全不同的微生物从幕后走到了研究台前。国际病毒分类委

8、员会(ICTV)2005年7月发表的最新病毒分类第八次报告显示，目前ICTV所承认的病毒有5450多个，分属3个目，73个科，289个属，1950多个种。病毒在自然界的分布十分广泛，可以感染人，植物，动物，真菌及细菌，常导致宿主发病，其中在人类的传染病中，由病毒引起的约占3／4。上世纪60年代，Wolf等人首次发现并分离了第一株鱼类病毒(WolfKet．a1．，1959)，病毒对水产养殖业的危害开始被人们重视，特