乳腺癌患者髓系来源抑制细胞的临床观察及相关免疫耐受机制探讨

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1、分类号：密级：学位类别：R737．9科学学位囹专业学位口学校代码：10062学号：2010602489学科门类：医学又肄眚科鼻等硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：乳腺癌患者髓系来源抑制细胞的临床观察及相关免疫耐受机制探讨TITLEClinicalsignificanceofmyeloid—derivedsuppressorcellsinbreastcancerpatientsandstudyonimmunospressionmechanisms一级学科：临床医学二级学科：肿

2、瘤学论文作者：杨宝宏指导教师：任秀宝教授导师组成员：于津浦副研究员天津医科大学研究生院二。一三年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：学位论文版权使用授权书日期：艄月吒本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有

3、权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密口，在——年解密后适用本授权书。本论文属于不保密田。(请在相对应的方框内打“√”)学位论文作者签名：导师签名：桶张日期：pfjr年乡月矽f7t越兰日期："l,14’年J、月l-9Ft天津医科大学硕士学位论文中又捅斐目的：检测乳腺癌患者肿瘤原位组织分离的一群髓系来源抑制细胞(MDSC)中吲哚胺2，3双加氧酶(indoleamine．2，

4、3-dioxygenase，IDO)的表达情况，探讨IDO对MDSC介导T淋巴细胞免疫抑制作用的影响。方法：收集30例乳腺癌患者的肿瘤组织和外周血，30例健康供者外周血，将肿瘤组织制成单细胞悬液，采用免疫磁珠技术分选肿瘤单细胞悬液中CD33+MDSC和健康供者外周血中的CD33+细胞，应用Westemblot和PCR方法检测MDSC中IDO的表达情况。将肿瘤组织来源MDSC和异体T淋巴细胞按照1：l比例混合培养3天，在加用和不加IDO特异性抑制剂1-MT条件下，利用Annexin．V凋亡试剂盒检测各组

5、T淋巴细胞凋亡率，利用ELISA法检测各组T淋巴细胞分泌的细胞因子量。结果：在正常人外周血、乳腺癌患者外周血、乳腺癌患者肿瘤单细胞悬液中MDSC所占比例分别为(4．9土4．38)％、(12．92士6．24)％、(17．1815．19)％。与正常人外周血相比，乳腺癌患者外周血和肿瘤单细胞悬液中MDSC比例显著升高(P<0．05)，Westernblot和PCR检测均发现此群MDSC中有IDO的过表达。T细胞单独培养时凋亡率为(2．40士0．66)％，MDSC和T细胞共孵育组中T细胞凋亡率为(12．30士

6、0．80)％，比T细胞单独培养时显著升高(P<0．05)，在共孵育过程中加用1-MT组的T细胞凋亡率为(3．30±0．58)％，与不加1-MT组差异具有统计学意义(P<0．05)。细胞因子检测的结果发现MDSC促进T淋巴细胞TGF—p、IL．10的释放，抑制IFN．^，的分泌，而对IL一4和IL—12的分泌影响并不明显，而加用1．MT后MDSC和T淋巴细胞共孵育组中TGF—B、IL．10的分泌水平与未加1一MT组相比显著降低，IFN．Y的分泌显著增加(P<0．05)。结论：乳腺癌病人原位肿瘤组织中li

7、nl．CD45+CDl3+CD33+CDl4一CDl5’的MDSC具有显著的免疫抑制作用。此群表型特异的细胞能够显著促进自体淋巴细胞的调亡，并显著抑制其分泌IFN吖，促进TGF—D、IL．10释放，MDSC发挥免疫抑制作用与IDO的过表达密切相关，通过抑制IDO酶活性可以纠正MDSC介导的免疫抑制作用。关键词：髓系来源抑制细胞乳腺癌吲哚胺2,3．双加氧酶T细胞免疫抑制天津医科大学硕士学位论文AbstractObjective：Thisstudyaimedtoexplorethesecretionofi

8、ndoleamine-2．3-dioxygenase(IDO)inmyeloid-derivedsuppressorcells(MDSC)anditsroleinimmunosuppression．Moreover，weanalyzedtherelevantimpactofMDSConTcellproliferationandcytokinesecretion．Methods：Peripheralbloodsampleswereobtainedfrom3