小鼠原位肝癌移植模型中髓系来源抑制性细胞的表达和功能检测

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4、发生发展，这使得HCC的免疫防治研究日趋重要。研究发现在荷瘤小鼠的血液、脾脏和肿瘤组织，以及肿瘤患者的外周血和肿瘤组织中存在大量的髓系来源抑制性细胞(myeloid．derivedsuppressorcells，MDSCs)，通过抑制机体免疫功能促进肿瘤发生侵袭转移。本实验旨在研究MDSCs在小鼠肝癌原位移植模型中的表达分布及其生物学功能，为后续开展MDSCs生物学、免疫学相关研究以及以MDSCs为靶标的肝癌免疫疗法提供实验及理论基础。实验方法将H22小鼠肝癌细胞注射到BALB／c雄性小鼠肝脏包膜下，构

5、建小鼠原位肝癌移植模型，10天后处死荷瘤小鼠，收集正常小鼠和荷瘤小鼠的外周血、骨髓、脾脏以及肝脏。通过流式细胞技术检测两组小鼠各个器官组织中MDSCs及其亚型聚集分布情况。进一步我们通过流式分选技术分选荷瘤小鼠骨髓中MDSCs并流式检测分选得到的MDSCs精氨酸代谢酶1、诱导型一氧化氮合酶及活性氧的表达，通过混合淋巴细胞反应检测MDSCs对T细胞增殖的影响。结果本实验成功构建小鼠原位移植肝癌模型；不论是在外周血、骨髓还是脾脏中，荷瘤小鼠中MDSCs及其亚型的表达均明显上调，差异具有统计学意义；荷瘤小鼠肝

6、脏中MDSCs及其两个亚型的表达较正常小鼠肝脏也有明显增高，在肝癌组织中MDSCs的表达较正常小鼠肝脏上调6．7倍，MDSCs两个亚型表达分别上调7．2倍和3．3倍；通过流式双色标记分选得到的MDSCs细胞不仅纯度高而且活力好，并且高表达Arg．1、iNOS和ROS，还能明显抑制T细胞增殖。结论在小鼠原位肝癌移植模型中，MDSCs表达明显上调，与临床肝癌患者表现一致；通过流式分选方法获得纯度高活力佳的骨髓系MDSCs细胞，这对于后续开展MDSCs相关研究奠定了基础。关键词：髓系来源抑制性细胞肝癌小鼠原位

7、移植模型流式分选AbstractBackgroundandaimsHepatocellularcarcinoma(HCC)isoneofthemostmalignantcancersinclinicwithrisingincidenceandmortalityinmanyregionsaroundtheworld，especiallyinchina．Thus，ThestudyontheimmunepreventionandtreatmentofHCChasbecomeincreasinglyimport

8、antandMDSCsmaybeasuitabletargetforHCCtherapy．Recentresearcheshavebeenfoundthatmyeloid-derivedsuppressorcells(MDSCs)playapivotalroleintumorassociatedimmunesuppression．Thepurposeofimmunotherapyistobreaklocaltumourimmunetoler