SDF1对糖尿病外周血EPCs功能影响及PI3KAKT信号转导机制的研究

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3、3年参月舻日摘要目的：1、观察基质细胞衍生因子．1(SDF．1)对糖尿病外周血内皮祖细胞(EPCs)功能的影响。2、探讨SDF．1对EPCs的影响是否与P13K／AKT信号通路有关。方法：1、10例健康人为健康对照组(HC组)，20例糖尿病患者为DM组，均采集空腹外周静脉血各20ml，肝素抗凝，密度梯度离心法获取外周血单个核细胞，EGM．2MV培养基(含5％FBS)培养4天后，吸弃上清液，用0．25％胰蛋白酶消化贴壁EPCs，倒置荧光显微镜鉴定DiI．acLDL和FITC．UEA．1双染色阳性者为正

4、在分化的EPCs，流式细胞仪检测其表面标志(CD34、CDl33及KDR)进一步鉴定EPCs。非干预组(HC2组及DM2组)上述培养条件继续培养，干预组(HCl组及DMl组1在上述基础上加入浓度为100ng／mlSDF．1培养至第7天。培养7天后，收集EPCs，然后分别采用改良的Boyden小室和体外血管生成试剂盒分别观察EPCs的迁移和体外血管生成能力。2、采集1例健康人和l例糖尿病患者空腹外周静脉血各20ml，EPCs的分离、培养同前，细胞培养至第四天进行换液，6孔依次为空白对照、1n∥mlSD

5、F．1、10ng／mlSDF一1、100ng／mlSDF-1、单纯AMD3100及100ng／mlSDF一1+AMD3100，培养至第七天。吸弃培养液，PBS冲洗2次，将贴壁细胞刮下，沉淀离心后加入细胞裂解液，重悬后冰浴离心，收集上清液，煮沸后高速离心lmin，即可进行SDS．PAGE电泳，最终进行蛋白印记分析。结果：1、DM2组的EPCs趋化迁移能力和血管形成能力明显低于HC2组(分别为15．50士2．224VS22．20+1．304and113．87士15．198VS181．80士9．202)，

6、差异有统计学意义(p

7、测两组人群EPCs中AKT蛋白的表达水平：对于HC组，AKT蛋白的表达在空白对照组和lng／mlSDF．1组(0．83+0．008VS0．84+0．004)差异无统计学意义(p>O．05)；lOng／mlSDF．1组AKT蛋白的表达较空白对照组(0．87+0．005VS0．834-0．008)高，差异有统计学意义(p

8、AKT蛋白的表达较空白对照组(0．75+0．014VS0．83+0．008)低，差异有统计学意义(p<0．001)；100ng／mlSDF一1+AMD3100组AKT蛋白的表达较lOOng／mlSDF．1组(0．644-0．023VS0．90+0．009)明显降低，差异有统计学意义(p<0．001)。对于DM组，AKT蛋白的表达在空白对照组、lng／mlSDF-1组、10ng／mlSDF-1组、lOOng／mlSDF一1组的表达呈递增的趋势(分别为：O．71+0．01