使用安捷伦1260Infinity液相色谱和柱后光

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1、使用安捷伦1260Infinity液相色谱和柱后光化学衍生方法同时测定四种黄曲霉毒素应用报告食品&农业作者肖尧安蓉液相色谱应用技术支持，生命科学和化学分析事业部安捷伦科技（中国）有限公司北京摘要在这篇应用报告中，我们开发了一个用于测定食品基质如谷物，芝麻酱等中黄曲霉毒素的方法，并对检出限(LOD)，定量限(LOQ)，重现性，回收率等方面进行了方法学考察。分析谷物，坚果等食品基质中黄曲霉毒素是保证食品安全的重要工作。在这篇报告中，我们介绍了一种同时测定四种主要黄曲霉毒素的柱后光化学衍生液相色谱荧光检测方法：样品经过免疫亲和小柱净化，采用柱后光化学衍生方法和荧光检测进行测定，这种方法

2、可以满足各个主要法规对于定量限的要求，并且比起常用的柱后电化学衍生方法更加容易操作。简介•Agilent1260Infinity柱温箱(G1316A)黄曲霉毒素是一种由真菌产生的有毒的致癌物质。这种真菌在合•Agilent1260Infinity荧光检测器(G1312B)，配置标准检测池适的温度湿度条件下会在土壤，谷物，坚果或腐烂的植物中生长。(8µL)自然界中自然产生的黄曲霉毒素至少有14种之多，其中毒性最大•柱后光化学衍生装置购买于中科汇仁科技公司，北京（PHRED-的是黄曲霉毒素B1。因此，很多国家和法规机构都对食物中黄曲HR光化学衍生器）柱后衍生装置串联于色谱柱出口与荧光

3、检霉毒素B1的含量做了严格规定，通常，对毒性比B1略小的其他测器入口之间。三种黄曲霉毒素B2，G1和G2的含量也会做出相应规定。例如欧色谱柱盟规定黄曲霉毒素B1的在食物如谷物，坚果中的含量最大允许范围在2.0到8.0µg/kg(ppb)之间，上述四种黄曲霉毒素总含量允AgilentPoroshell120EC-C18,3.0x50mm,2.7µm(p/n699975-302)许值范围在4.0到15.0µg/kg(ppb)之间[1,2]。美国FDA规定食品免疫亲和小柱(RIDA®Aflatoxincolumn)购买于德国Biopharm含量限定值为20µg/kg，饲料含量限值为30

4、0µg/kg[3]。中国国标公司GBT18979-2003规定四种黄曲霉毒素总量检出限应为1µg/kg[4]。软件黄曲霉毒素测定通常使用液相色谱-荧光检测的方法完成。但是由OpenLABCDSChemStationEditionforLC&LCMSSystems,于有些黄曲霉毒素在含水流动相中会发生荧光淬灭，所以需要采Rev.C.01.03[37]取一定的衍生技术将它们衍生为不会淬灭的型态[5]。目前应用比溶剂和试剂较普遍的衍生方法是在溴的作用下进行柱后电化学衍生[6,7]。这种溶剂方法有很好的灵敏度，但是也有很多缺点，比如需要使用到对仪甲醇(HPLC级)购买于迪马公司.超纯水由

5、美国Millipore公司器有强烈腐蚀作用的含溴流动相，并且衍生装置需要定期维护。MilliQ超纯水制备系统制备另一种衍生方法是使用紫外光使黄曲霉毒素与水进行衍生反应，由标准品于水是反相色谱中的常用溶剂，所以这种方法操作十分简便，并黄曲霉毒素标准品(99%+B1:1.055µg/mL,B2:0.327µg/mL,且在灵敏度上与电化学衍生方法也有较好的可比性[8]。G1:1.082µg/mLandG2:0.309µg/mL溶解于甲苯/乙腈(98:2))购买于Supelco公司在这篇应用报告中，我们在安捷伦1260Infinity四元泵液相色谱系统上开发了一个灵敏快速的用于分析黄曲霉

6、毒素B1，B2，G1和样品玉米粉样品购买于本地超市。加标玉米粉样品为在样品前处理前G2检测的柱后光化学衍生-荧光检测方法，这个方法在定量限和检出限上的表现完全可以满足各个主要法规的要求。向上述玉米粉样品中加入相当于标准曲线级别4的标准品（浓度数值见表1）。标准添加玉米粉样品（含有9.00ppbB1和0.6ppbB2）购买于Trilogy公司。芝麻酱样品（含有4.57ppbB1，其他三实验种浓度未知）来自于客户。酸枣仁样品（2010版中国药典规定进行仪器黄曲霉毒素检测）购买于本地药店。安捷伦1260Infinity液相色谱系统:样品和标准品制备•Agilent1260Infinit

7、y四元泵(G1311B)标准溶液配制：取10µL标准品溶液置于10mL瓶中，室温下氮气•Agilent1260Infinity标准自动进样器(G1329B)吹干，用甲醇-水溶液(50:50,v:v)复溶，之后稀释成如下浓度作为标准曲线不同浓度点：2表1.浓度级别浓度级别123456B10.10550.26380.52751.0555.27510.55B20.03270.08180.16350.3271.6353.27G10.10820.27050.5411.0825.4110.8